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人CAMP反應元件結合蛋白ELISA試劑盒操作說明

閱讀:1751      發(fā)布時間:2011-5-9
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*,,人CAMP反應元件結合蛋白ELISA試劑盒操作說明

1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,。
240pg/ml 5號標準品 150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
120pg/ml 4號標準品 150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
60pg/ml 3號標準品 150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
30pg/ml 2號標準品 150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
15pg/ml 1號標準品 150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液

2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,,其余各步操作相同)、標準孔,、待測樣品孔,。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,,然后再加待測樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍),。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,,輕輕晃動混勻,。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,,棄去液體,,甩干,每孔加滿洗滌液,,靜置30秒后棄去,,如此重復5次,拍干,。
6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3,。
8. 洗滌:操作同5,。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,,輕輕震蕩混勻,,37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色),。
11. 測定:以空白空調零,,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行,。

第二,,人CAMP反應元件結合蛋白ELISA試劑盒操作程序

1.準備試劑,樣品和標準品
2.加入準備好的樣品和標準品,,37℃反應30分鐘
3.洗板5次,,加入酶標試劑,37℃反應30分鐘
4.洗板5次,,加入顯色液A,、B,37℃反應10分鐘
5.加入終止液
6.15分鐘之內度OD值
7.計算

第三,,人CAMP反應元件結合蛋白ELISA試劑盒計算
以標準物的濃度為橫坐標,,OD值為縱坐標,,在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度,;再乘以稀釋倍數(shù),;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,,計算出樣品濃度,,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度,。
 

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