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人妊娠特異性β1糖蛋白(SP1/PSβ1-G)ELISA試劑盒說明書

閱讀:1727      發(fā)布時間:2010-12-29
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檢測范圍:                                                          96T
30ng/ml- 1000ng/ml
 
使用目的:
本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中妊娠特異性β1糖蛋白(SP1/PSβ1-G)含量,。
實驗原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中妊娠特異性β1糖蛋白(SP1/PSβ1-G)水平,。用純化的妊娠特異性β1糖蛋白(SP1/PSβ1-G)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入妊娠特異性β1糖蛋白(SP1/PSβ1-G),,再與HRP標記的妊娠特異性β1糖蛋白(SP1/PSβ1-G)抗體結(jié)合,,形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色,。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的妊娠特異性β1糖蛋白(SP1/PSβ1-G)呈正相關(guān),。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),,通過標準曲線計算樣品中妊娠特異性β1糖蛋白(SP1/PSβ1-G)濃度。
試劑盒組成

1
30倍濃縮洗滌液
20ml×1瓶
7
終止液
6ml×1瓶
2
酶標試劑
6ml×1瓶
8
標準品(1600ng/ml)
0.5ml×1瓶
3
酶標包被板
12孔×8條
9
標準品稀釋液
1.5ml×1瓶
4
樣品稀釋液
6ml×1瓶
10
說明書
1份
5
顯色劑A液
6ml×1瓶
11
封板膜
2張 
6
顯色劑B液
6ml×1/瓶
12
密封袋
1個

1.標本采集后盡早進行提取,,提取按相關(guān)文獻進行,,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,,可將標本放于-20℃保存,,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性,。
操作步驟
1.         標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

800ng/ml
5號標準品
150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
400ng/ml
4號標準品
150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
200ng/ml
3號標準品
150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
100ng/ml
2號標準品
150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
50ng/ml
1號標準品
150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液

 
 
2.         加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,,其余各步操作相同),、標準孔、待測樣品孔,。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,,然后再加待測樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍),。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,,輕輕晃動混勻,。
3.         溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  
4.         配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5.         洗滌:小心揭掉封板膜,,棄去液體,,甩干,每孔加滿洗滌液,,靜置30秒后棄去,,如此重復(fù)5次,拍干,。
6.         加酶:每孔加入酶標試劑50μl,,空白孔除外。
7.         溫育:操作同3。
8.         洗滌:操作同5,。
9.         顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,,37℃避光顯色15分鐘.
10.     終止:每孔加終止液50μl,,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
11.     測定:以空白空調(diào)零,,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值),。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。
操作程序總結(jié):
 
計算
  以標準物的濃度為橫坐標,,OD值為縱坐標,,在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度,;再乘以稀釋倍數(shù),;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,,計算出樣品濃度,,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度,。
注意事項
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,,酶標包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。
2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果,。
3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差,。一次加樣時間好控制在5分鐘內(nèi),,如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣,。
4. 請每次測定的同時做標準曲線,,好做復(fù)孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值),,請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,,計算時請后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
5. 封板膜只限一次性使用,,以避免交叉污染,。
6.底物請避光保存。
7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8.所有樣品,,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。
9.本試劑不同批號組分不得混用。
10. 如與英文說明書有異,,以英文說明書為準,。
1.試劑盒保存:;2-8,。
2.有效期:6個月

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