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   ASM試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)名疫吸附實驗（ELISA）,。已知ASM濃度的標(biāo)準(zhǔn)品,、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進行檢測。先將ASM和生物素標(biāo)記的抗體同時溫育,。洗滌后,，加入親和素標(biāo)記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,，然后加入底物A,、B，和酶結(jié)合物同時作用,。產(chǎn)生顏色,。顏色的深淺和樣品中ASM的濃度呈比例關(guān)系。

 

 

1. 蒸餾水

2. 加樣器：5ul,、10ul,、50ul、100ul,、200ul,、500ul、1000ul

3. 振蕩器及磁力攪拌器等,。

 

1. 避免直接接觸終止液和底物A,、B。一旦接觸到這些液體,，請盡快用水沖洗,。

2. 實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品,。

3. 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份,。

 

1. 試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存，使用前恢復(fù)到室溫,。稀釋過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,，不可保存。

2. 實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,，密封保存,，以免變質(zhì)。

3. 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好,。不同批號的試劑不要混用,。保質(zhì)前使用。

4. 使用一次性的吸頭以免交叉污染,，吸取終止液和底物A,、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器,。

5. 使用干凈的塑料容器配置洗滌液,。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。

6. 洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干,，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水,。

7. 底物A應(yīng)揮發(fā),，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,，避免長時間暴露于光下,。避免用手接觸，     有毒,。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值,。

8. 加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣,。

9. 按照說明書中標(biāo)明的時間,、加液的量及順序進行溫育操作。

1,、 血清……操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,。收集血液后,，1000×g    離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

2,、 血漿……EDTA,、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測,。1000×g離心30分鐘去除顆粒,。

3、 細胞上清液……1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物,。

4,、 組織勻漿……將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,，取上清液,。

5、 保存……如果樣品不立即使用,，應(yīng)將其分成小部分-70℃保存,，避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血,。如果血清中大量顆粒,，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍,。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。

1. 標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋應(yīng)在實驗時準(zhǔn)備，不能儲存,。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻,。稀釋比例按下表中進行：

 

2. 洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍釋。

1. 使用前,，將所有試劑充分混勻,。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡,，產(chǎn)生加樣上的誤差,。

2. 根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔,。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。 標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1：1 稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi),。

3. 加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔,、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體,。蓋上膜板,，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時,。

4. 甩去孔內(nèi)液體,，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒,，甩去洗滌液,，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次,。如果用洗板機洗滌,，洗滌次數(shù)增加一次。

5. 每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育30分鐘。

6.  甩去孔內(nèi)液體,，每孔加滿洗滌液,，振蕩30秒，甩去洗滌液,，用吸水紙拍干,。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機洗滌,，洗滌次數(shù)增加一次,。

7. 每孔加入底物A、B各50ul,，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育10分鐘,。避免光照。

8. 取出酶標(biāo)板,，迅速加入50ul終止液,，加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。

 

 

1. 靈敏度：小的檢測濃度小于1號標(biāo)準(zhǔn)品,，稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990,。

2. 特異性：不與其它細胞因子反應(yīng),。

3. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%,。

 

6號標(biāo)準(zhǔn)品以上的結(jié)果為非線性的,，根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線無法得到的結(jié)果。

 

1,、本產(chǎn)品僅供研究使用,，不得用于臨床實驗或人體實驗，否則所產(chǎn)生的一切后果,，本公司概不承擔(dān),。

 

1、儀器值：于波長450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值

2,、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)（Y）,，相應(yīng)的P-selectin標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)（X），做得相應(yīng)的曲線,，樣品的P-selectin含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度,，再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程式,，將樣品的OD值代入方程式,，計算出樣品濃度，在乘以稀釋倍數(shù),，即為樣品的實際濃度,。

3、檢測值范圍： 0-200ng/ml

4,、敏感度： 0.1ng/ml