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在凝膠電泳實(shí)驗(yàn)或其他核酸分離實(shí)驗(yàn)中,常用EB(Ethidiumbromide,,EtBr)作非放射性的Marker,,來(lái)識(shí)別和顯示核酸條帶。EB是一種深紅色不易揮發(fā)的晶體,,微溶于水,。當(dāng)被紫外線照射時(shí)能發(fā)出紅褐色的熒光。盡管EB是一種的顯色劑,,但它的高危險(xiǎn)性要求特殊的安全管理和回收流程,。
人體危害
EB是一種強(qiáng)誘變劑(可能造成遺傳性危害),直接接觸有中等毒性,。EB可以通過(guò)皮膚吸收,,因此應(yīng)當(dāng)避免一切與EB的直接接觸。EB對(duì)皮膚,,眼睛,,口腔和上呼吸道系統(tǒng)有刺激性作用。應(yīng)將EB安全密封,,并密閉存放于干燥避光處,。
安全預(yù)防措施 良好的操作習(xí)慣可以降低危害接觸,。
在通風(fēng)廚使用粉狀或結(jié)晶EB時(shí),,或使用含EB的溶液或片劑時(shí),,為避免吸入EB,應(yīng)避免與EB的直接接觸,。
為避免皮膚接觸到溶液中的EB,,應(yīng)戴手套、實(shí)驗(yàn)服和防護(hù)鏡,,并勤換手套,。
要告知EB使用者EB的危險(xiǎn)性、正確使用及回收方法,。此外,,經(jīng)培訓(xùn)的才能通過(guò)實(shí)驗(yàn)室化學(xué)衛(wèi)生管理計(jì)劃,獲得CHP(thelaboratory’s ChemicalHygiene Plan)的證書,。擁有該證書者才算是按標(biāo)準(zhǔn)操作使用EB,。
在使用含EB類材料前需制訂一份EB安全使用說(shuō)明。
進(jìn)入工作區(qū)域需佩戴防護(hù)鏡并確認(rèn)有可使用的洗眼及淋浴設(shè)施,。
和其他化學(xué)藥品一樣,,在EB的使用及放置房間內(nèi)不準(zhǔn)飲食。
使用后脫去手套及時(shí)洗手,,*處理掉殘留的EB,。
在使用UV照射EB時(shí),戴上紫外線防護(hù)鏡或用紫外屏蔽玻璃以屏蔽,。
緊急處理措施
誤入眼睛措施:如果EB不慎落入眼睛,,立即用大量的冷水沖洗至少15分鐘。能用洗眼藥水進(jìn)行擦洗,。
誤接觸措施:如果皮膚不慎接觸到EB,,立即脫去被污染的衣物。再用肥皂清洗接觸到的皮膚后,,大量的冷水沖洗至少15分鐘,。
誤服措施:如果不慎誤服或吸入EB,將受害者移至通風(fēng)處,,并及時(shí)送醫(yī)救治,。
泄漏污染處理:如果EB不慎灑落在水槽或者下水道,請(qǐng)立刻告知相關(guān)管理部門,。如果大量EB灑落,,應(yīng)立即通知在該工作域的所有人員,將人員疏散并開(kāi)始清理被污染的區(qū)域,。在未清理好現(xiàn)場(chǎng)的同時(shí),,應(yīng)豎牌警告他人勿入,。并為有關(guān)部門提供資料及協(xié)作。
若僅微量EB排入下水道并被及時(shí)發(fā)現(xiàn),,在確保安全的情況下可由實(shí)驗(yàn)室熟知EB危害的人員進(jìn)行清理,。當(dāng)然,清理EB的人員是必須經(jīng)過(guò)安全培訓(xùn),,并有防范意識(shí)和相應(yīng)的處理裝置,。如果實(shí)驗(yàn)室的人員未經(jīng)培訓(xùn)或沒(méi)有處理裝置,請(qǐng)相關(guān)部門進(jìn)行處理,。
凈化處理:在清理微量灑落的EB時(shí),,需全程穿著防護(hù)服(按上文所描述的“安全預(yù)防措施”)。用紫外燈照射確定污染的位置,。EB的熒光是很容易看到的,。如果灑落的EB是粉末狀,用濕紙巾擦拭后并按程序清理,。如果灑落的是液體,,用干紙巾吸干后再用UV光檢查殘余的EB,然后按程序清理,。
當(dāng)準(zhǔn)備或使用除污劑時(shí)配戴全面防護(hù)裝備(實(shí)驗(yàn)服,、手套和防護(hù)鏡)。在用EB前,,需預(yù)先準(zhǔn)備好除污劑:4.2克亞硝酸鈉(NaNO2,CAS # 7362-00-0)和20毫升的次磷酸(50%) (H3PO2, CAS# 6303-21-5),,加入300毫升水。
1)用紙巾蘸取去污劑擦洗被污染的區(qū)域,,再用紙巾加自來(lái)水清洗5次,,每次實(shí)用的紙巾都必須是干凈未污染的。
2)用紫外光檢查已清洗的區(qū)域,,以確保所有EB被清除,。必要時(shí)可重復(fù)步驟1。如果酸可能損害被污染的表面,,可用適量自來(lái)水稀釋去污劑后再使用,。
3)將所有使用過(guò)的紙巾用去污劑浸泡1小時(shí),取出并將附著的去污劑擰干收回容器內(nèi),。被處理時(shí)使用的手套和其他物件可雙層包裹再扔棄,。
4)在去污劑的容器上標(biāo)上EB去污劑,并注明成分,。將去污使用過(guò)的物件打包,,后續(xù)處理程序如下。
處理EB的其他方法
凝膠電泳可改用低毒性的其他材料來(lái)替代EB(
例如,,可用SYBRSafeTM 對(duì)DNA凝膠染色),,以減少在實(shí)驗(yàn)室里可能發(fā)生的危險(xiǎn),。處置EB的替代品也需有相應(yīng)部門決定其處理方法后再做廢棄處理。如有任何疑問(wèn),,請(qǐng)?jiān)摬块T,。
文章關(guān)鍵詞:凝膠電泳
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