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在凝膠電泳實驗或其他核酸分離實驗中,,常用EB(Ethidiumbromide,,EtBr)作非放射性的Marker,,來識別和顯示核酸條帶,。EB是一種深紅色不易揮發(fā)的晶體,微溶于水,。當被紫外線照射時能發(fā)出紅褐色的熒光,。盡管EB是一種的顯色劑,但它的高危險性要求特殊的安全管理和回收流程,。
人體危害
EB是一種強誘變劑(可能造成遺傳性危害),,直接接觸有中等毒性。EB可以通過皮膚吸收,,因此應(yīng)當避免一切與EB的直接接觸,。EB對皮膚,,眼睛,,口腔和上呼吸道系統(tǒng)有刺激性作用。應(yīng)將EB安全密封,,并密閉存放于干燥避光處,。
安全預(yù)防措施 良好的操作習慣可以降低危害接觸。
在通風廚使用粉狀或結(jié)晶EB時,,或使用含EB的溶液或片劑時,,為避免吸入EB,應(yīng)避免與EB的直接接觸,。
為避免皮膚接觸到溶液中的EB,,應(yīng)戴手套、實驗服和防護鏡,,并勤換手套,。
要告知EB使用者EB的危險性,、正確使用及回收方法。此外,,經(jīng)培訓(xùn)的才能通過實驗室化學(xué)衛(wèi)生管理計劃,,獲得CHP(thelaboratory’s ChemicalHygiene Plan)的證書。擁有該證書者才算是按標準操作使用EB,。
在使用含EB類材料前需制訂一份EB安全使用說明,。
進入工作區(qū)域需佩戴防護鏡并確認有可使用的洗眼及淋浴設(shè)施。
和其他化學(xué)藥品一樣,,在EB的使用及放置房間內(nèi)不準飲食,。
使用后脫去手套及時洗手,*處理掉殘留的EB,。
在使用UV照射EB時,,戴上紫外線防護鏡或用紫外屏蔽玻璃以屏蔽。
緊急處理措施
誤入眼睛措施:如果EB不慎落入眼睛,,立即用大量的冷水沖洗至少15分鐘,。能用洗眼藥水進行擦洗。
誤接觸措施:如果皮膚不慎接觸到EB,,立即脫去被污染的衣物,。再用肥皂清洗接觸到的皮膚后,大量的冷水沖洗至少15分鐘,。
誤服措施:如果不慎誤服或吸入EB,,將受害者移至通風處,并及時送醫(yī)救治,。
泄漏污染處理:如果EB不慎灑落在水槽或者下水道,,請立刻告知相關(guān)管理部門。如果大量EB灑落,,應(yīng)立即通知在該工作域的所有人員,,將人員疏散并開始清理被污染的區(qū)域。在未清理好現(xiàn)場的同時,,應(yīng)豎牌警告他人勿入,。并為有關(guān)部門提供資料及協(xié)作。
若僅微量EB排入下水道并被及時發(fā)現(xiàn),,在確保安全的情況下可由實驗室熟知EB危害的人員進行清理,。當然,清理EB的人員是必須經(jīng)過安全培訓(xùn),,并有防范意識和相應(yīng)的處理裝置,。如果實驗室的人員未經(jīng)培訓(xùn)或沒有處理裝置,請相關(guān)部門進行處理,。
凈化處理:在清理微量灑落的EB時,,需全程穿著防護服(按上文所描述的“安全預(yù)防措施”),。用紫外燈照射確定污染的位置。EB的熒光是很容易看到的,。如果灑落的EB是粉末狀,,用濕紙巾擦拭后并按程序清理。如果灑落的是液體,,用干紙巾吸干后再用UV光檢查殘余的EB,,然后按程序清理。
當準備或使用除污劑時配戴全面防護裝備(實驗服,、手套和防護鏡),。在用EB前,需預(yù)先準備好除污劑:4.2克亞硝酸鈉(NaNO2,CAS # 7362-00-0)和20毫升的次磷酸(50%) (H3PO2, CAS# 6303-21-5),,加入300毫升水,。
1)用紙巾蘸取去污劑擦洗被污染的區(qū)域,再用紙巾加自來水清洗5次,,每次實用的紙巾都必須是干凈未污染的,。
2)用紫外光檢查已清洗的區(qū)域,以確保所有EB被清除,。必要時可重復(fù)步驟1,。如果酸可能損害被污染的表面,可用適量自來水稀釋去污劑后再使用,。
3)將所有使用過的紙巾用去污劑浸泡1小時,,取出并將附著的去污劑擰干收回容器內(nèi)。被處理時使用的手套和其他物件可雙層包裹再扔棄,。
4)在去污劑的容器上標上EB去污劑,,并注明成分。將去污使用過的物件打包,,后續(xù)處理程序如下,。
處理EB的其他方法
凝膠電泳可改用低毒性的其他材料來替代EB(
例如,可用SYBRSafeTM 對DNA凝膠染色),,以減少在實驗室里可能發(fā)生的危險,。處置EB的替代品也需有相應(yīng)部門決定其處理方法后再做廢棄處理,。如有任何疑問,,請該部門。
文章關(guān)鍵詞:凝膠電泳
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