液相色譜層析分離按其固定相的性質(zhì)可分為凝膠色譜,、疏水性液相色譜、反相液相色譜,、離子交換液相色譜,、親和液相色譜以及聚焦液相色譜等類型。用不同類型的液相色譜分離或分析各種化合物的原理基本上與相對(duì)應(yīng)的普通液相層析的原理相似,。其不同之處是液相色譜靈敏,、快速、分辨率高,、重復(fù)性好,，且須在色譜儀中進(jìn)行。
液相色譜儀主要有進(jìn)樣系統(tǒng),、輸液系統(tǒng),、分離系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng),，下面將分別敘述其各自的組成與特點(diǎn),。
1,、進(jìn)樣系統(tǒng) 　　一般采用隔膜注射進(jìn)樣器或高壓進(jìn)樣器完成進(jìn)樣操作，進(jìn)樣量是恒定的,。這對(duì)提高分析樣品的重復(fù)性是有益的,。
2、輸液系統(tǒng) 　　該系統(tǒng)包括高壓泵,、流動(dòng)相貯存器和梯度儀三部分,。高壓泵的一般壓強(qiáng)為l.47~4.4×107Pa，流速可調(diào)且穩(wěn)定,，當(dāng)高壓流動(dòng)相通過層析柱時(shí),，可降低樣品在柱中的擴(kuò)散效應(yīng)，可加快其在柱中的移動(dòng)速度,，這對(duì)提高分辨率,、回收樣品、保持樣品的生物活性等都是有利的,。流動(dòng)相貯存和梯度儀,，可使流動(dòng)相隨固定相和樣品的性質(zhì)而改變，包括改變洗脫液的極性,、離子強(qiáng)度,、pH值，或改用競爭性抑制劑或變性劑等,。這就可使各種物質(zhì)（即使僅有一個(gè)基團(tuán)的差別或是同分異構(gòu)體）都能獲得有效分離,。
3、分離系統(tǒng) 　　該系統(tǒng)包括色譜柱,、連接管和恒溫器等,。色譜柱一般長度為10～50cm（需要兩根連用時(shí)，可在二者之間加一連接管）,，內(nèi)徑為2～5mm,，由"不銹鋼或厚壁玻璃管或鈦合金等材料制成，住內(nèi)裝有直徑為5～10μm粒度的固定相（由基質(zhì)和固定液構(gòu)成）,。固定相中的基質(zhì)是由機(jī)械強(qiáng)度高的樹脂或硅膠構(gòu)成,，它們都有惰性（如硅膠表面的硅酸基團(tuán)基本已除去）、多孔性（孔徑可達(dá)1000?）和比表面積大的特點(diǎn),，加之其表面經(jīng)過機(jī)械涂漬（與氣相色譜中固定相的制備一樣）,，或者用化學(xué)法偶聯(lián)各種基團(tuán)（如磷酸基、季胺基,、羥甲基,、苯基、氨基或各種長度碳鏈的烷基等）或配體的有機(jī)化合物,。因此,，這類固定相對(duì)結(jié)構(gòu)不同的物質(zhì)有良好的選擇性,。例如，在多孔性硅膠表面偶聯(lián)豌豆凝集素（PSA）后,，就可以把成纖維細(xì)胞中的一種糖蛋白分離出來,。
另外，固定相基質(zhì)粒小,，柱床極易達(dá)到均勻,、致密狀態(tài)，極易降低渦流擴(kuò)散效應(yīng),?；|(zhì)粒度小，微孔淺,，樣品在微孔區(qū)內(nèi)傳質(zhì)短,。這些對(duì)縮小譜帶寬度、提高分辨率是有益的,。根據(jù)柱效理論分析,，基質(zhì)粒度小，塔板理論數(shù)N就越大,。這也進(jìn)一步證明基質(zhì)粒度小,，會(huì)提高分辨率的道理。 　　再者,，液相色譜的恒溫器可使溫度從室溫調(diào)到60C，通過改善傳質(zhì)速度,，縮短分析時(shí)間,，就可增加層析柱的效率。
4,、檢測系統(tǒng) 　　液相色譜常用的檢測器有紫外檢測器,、示差折光檢測器和熒光檢測器三種。 ?。?）紫外檢測器 　　該檢測器適用于對(duì)紫外光（或可見光）有吸收性能樣品的檢測,。其特點(diǎn)：使用面廣（如蛋白質(zhì)、核酸,、氨基酸,、核苷酸、多肽,、激素等均可使用）,；靈敏度高（檢測下限為10-10?g/ml）；線性范圍寬,；對(duì)溫度和流速變化不敏感,；可檢測梯度溶液洗脫的樣品,。
（2）示差折光檢測器 　　凡具有與流動(dòng)相折光率不同的樣品組分，均可使用示差折光檢測器檢測,。目前,，糖類化合物的檢測大多使用此檢測系統(tǒng)。這一系統(tǒng)通用性強(qiáng),、操作簡單,，但靈敏度低（檢測下限為10-7?g/ml），流動(dòng)相的變化會(huì)引起折光率的變化,，因此,，它既不適用于痕量分析，也不適用于梯度洗脫樣品的檢測,。
（3）熒光檢測器 　　凡具有熒光的物質(zhì),，在一定條件下，其發(fā)射光的熒光強(qiáng)度與物質(zhì)的濃度成正比,。因此,，這一檢測器只適用于具有熒光的有機(jī)化合物（如多環(huán)芳烴、氨基酸,、胺類,、維生素和某些蛋白質(zhì)等）的測定，其靈敏度很高（檢測下限為10-12～10-14?g/ml）,，痕量分析和梯度洗脫作品的檢測均可采用,。
（4）數(shù)據(jù)處理系統(tǒng) 　　該系統(tǒng)可對(duì)測試數(shù)據(jù)進(jìn)行采集、貯存,、顯示,、打印和處理等操作，使樣品的分離,、制備或鑒定工作能正確開展,。
文章關(guān)鍵詞：液相色譜層析分離