層析柱安裝的每一個(gè)步驟都很關(guān)鍵
層析柱是凝膠層析技術(shù)中的主體,，一般用玻璃管或有機(jī)玻璃管。根據(jù)樣品混合物中各組分在固定相和流動(dòng)相中分配系數(shù)不同,，從而分離的一種層析法,。層析柱的直徑大小不影響分離度，樣品用量大,，可加大柱的直徑,，一般制備用凝膠柱，直徑大于2厘米,，但在加樣時(shí)應(yīng)將樣品均勻分布于凝膠柱床面上,。此外， 直徑加大,，洗脫液體體積增大,，樣品稀釋度大。分離度取決于柱高,，為分離不同組分,，凝膠柱床必須有適宜的高度，分離度與柱高的平方根相關(guān),，但由于軟凝膠柱過(guò)高擠壓變形阻塞,，一般不超過(guò)1米。分族分離時(shí)用短柱,，一般凝膠柱長(zhǎng)20-30厘米,，柱高與直徑的比較5:1─10:1，凝膠床體積為樣品溶液體積的4-10倍,。 分級(jí)分離時(shí)柱高與直徑之線為20:1─100:1,，常用凝膠柱有50×25厘米,，10×25厘米。層析柱濾板下的死體積應(yīng)盡可能的小,，如果支掌濾板下的死體積大,，被分離組分之間重新混合的可能性就大，其結(jié)果是影響洗脫峰形,，出現(xiàn)拖尾出象,，降低分辯力。在分離時(shí),，死體積不能超過(guò)總床體積的1/1000,。
簡(jiǎn)述層析柱的安裝流程：
1、檢測(cè)層析柱的各個(gè)部件,，確保干凈,、完整，擰上下端堵頭,，擰緊膨脹圈,，然后將層析柱垂直 固定在鐵架臺(tái)上，將裝柱器安裝在層析柱上端,。
2,、往層析柱中加入適量的20%乙醇，打開(kāi)下端口,，重力流,，排除下篩網(wǎng)中滯留的氣泡，在液面 低至1-2cm高度時(shí)關(guān)閉層析柱下端出口,。
3,、用玻璃棒緊靠柱子內(nèi)壁引流，將搖勻的介質(zhì)加入到層析柱中,，這可以減少氣泡的產(chǎn)生,。迅速 用20%乙醇填滿柱子和裝柱器，裝上裝柱器蓋子,，連接到?KTA上,。
4、打開(kāi)層析柱下端,，開(kāi)始以30cm/h流速裝柱,，直至柱床界面平穩(wěn)，停止裝柱,，打開(kāi)裝柱器蓋子,，用虹吸法去除界面上端的液體，去掉裝柱器,，然后小心的用20%乙醇封滿 柱子剩余部分,。
5,、擰緊膨脹圈,，繼續(xù)用裝柱流速壓柱,，至少保持3個(gè)柱體積，以界面不變?yōu)橹?，在界面處做上記?hào),，關(guān)閉泵，并關(guān)閉柱子下端出口,，使層析柱上端和泵斷開(kāi)（轉(zhuǎn)接器上接口是打開(kāi)的）,，略擰松 膨脹圈，緩慢向下轉(zhuǎn)動(dòng)調(diào)節(jié)桿,，到記號(hào)處停止,，然后再擰緊膨脹圈，關(guān)閉上接口,。
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