酶標(biāo)板一般要比細(xì)胞培養(yǎng)板貴，細(xì)胞板主要做細(xì)胞培養(yǎng),，但也可以用來測蛋白濃度,；酶標(biāo)板包括包被板和反應(yīng)板，一般不能用做細(xì)胞培養(yǎng),，它主要做免疫酶聯(lián)反應(yīng)后的蛋白檢測,，它需要更高的要求還需要特定的酶標(biāo)工作液。如下是個用酶標(biāo)板檢測冠狀病毒IgM/IgG抗體例子：
一,、酶標(biāo)板的檢測操作步驟：
1．加樣品：將標(biāo)本稀釋液100ul（或2滴）加到包被板內(nèi)（預(yù)留陰陽性及空白對照2－5孔）,，將待檢血清用PBS或生理鹽水按1：20稀釋后取10ul加入反應(yīng)孔內(nèi)。
2．加對照：加入陰性對照1－3孔,，陽性對照1孔,，各100ul對照血清?？瞻讓φ?孔空置,。
3．溫育：將反應(yīng)板震蕩使樣品混勻后，置37℃溫箱或水浴反應(yīng)20分鐘,。
4．洗板：用蒸餾水將濃縮洗滌液15ml稀釋至300ml,。
（1）手洗：將反應(yīng)板孔內(nèi)容物傾出,，將洗滌液注滿反應(yīng)孔,，放置30秒鐘后用力甩去，如此重復(fù)5次后拍干,。
?。?）機(jī)洗：5次，每孔注入洗滌液200ul或注滿,，停留30秒鐘后吸盡拍干,。
5．加酶標(biāo)工作液：每孔加入100ul（或2滴）酶標(biāo)工作液，置37℃溫箱反應(yīng)20分鐘后,，洗板5次,，洗板操作同步驟4。
6．顯色和終止反應(yīng)：將底物A、B液各50ul（或1滴）加到反應(yīng)孔內(nèi),，37℃避光顯色10分鐘,。每孔加入終止液50ul（或1滴）混勻終止反應(yīng)。
二,、酶標(biāo)板的檢測結(jié)果判定：
1．酶標(biāo)儀設(shè)定波長450nm,，先用空白調(diào)零，然后測定各孔OD值,；如果選用雙波長測定,，不必設(shè)置空白對照孔。
2．當(dāng)陰性對照平均OD值小于0.08,，陽性對照（pc）OD值大于0.30時,，說明試劑盒有效且實(shí)驗(yàn)操作正確，否則應(yīng)當(dāng)重復(fù)試驗(yàn),。
3．臨界值（CUT—OFF VALUE）＝0.15＋陰性對照平均（NC）OD值（當(dāng)陰性平均OD值小于0.05時,，按0.05計算,；當(dāng)陰性平均OD值大于或等于等于0.05時按實(shí)際值計算）,。
4．標(biāo)本OD值≤臨界值為陰性，標(biāo)本OD值>臨界值為陽性,。
酶標(biāo)板經(jīng)表面改性處理后擁有帶正電荷的氨基,，其疏水鍵由親水鍵取代。該類酶標(biāo)板適合作為小分子蛋白的固相載體,。使用合適的緩沖液和pH值,，其表面可通過離子鍵與帶負(fù)電荷的小分子結(jié)合。由于其表面的親水特性和可通過其它交聯(lián)劑共價結(jié)合的能力,，可用于固定溶于Triton-100,、Tween 20等去污劑的蛋白分子。該類板的缺陷為由于降低了疏水性,，一部分蛋白分子無法結(jié)合,；此外，其表面需有效地封閉,。由于親水和共價的表面特性,，使用的封閉液必須能夠與非反應(yīng)性氨基基團(tuán)和所選擇的交聯(lián)劑中任何功能基團(tuán)發(fā)生作用。
12
立即詢價
您提交后,，專屬客服將第一時間為您服務(wù)