收好這一份層析柱使用指南,，幫您在實(shí)驗(yàn)過程中從容應(yīng)對(duì)各種突發(fā)狀況，更好的完成實(shí)驗(yàn)操作,。
1.層析柱進(jìn)氣泡怎么辦,？
空氣進(jìn)入，如緩沖液走空,，連接進(jìn)入系統(tǒng)過程中
○ 用純水反向沖洗,，如果有柱位閥可直接切換流向，沒有的話可將柱子反接
○ 對(duì)于大多數(shù)層析柱來說可用乙醇沖洗,，以提高排氣效率
緩沖液中有氣泡
○ 上柱前將緩沖液脫氣
○ 在緩沖液入口使用空氣感應(yīng)器
溫度影響,，如在冷室操作后馬上在室溫操作，或低溫緩沖液直接在室溫使用
○ 將緩沖液在使用前達(dá)到熱平衡
2.層析柱干了還可以再使用嗎,？
○ 通常不可以,，但也取決于具體的純化需求。
3.膠平面與柱頭有間隙怎么辦,？
由于不當(dāng)裝填或者篩網(wǎng)孔徑與填料粒徑不匹配,，導(dǎo)致填料漏出
○ 更換篩網(wǎng),，重新裝填，層析柱堵塞,，導(dǎo)致反壓增大
○ 根據(jù)說明書清洗
○ 更換濾膜
○ 樣品上柱前先澄清
柱床裝填太差,，裝柱過程中未有效壓縮填料
○ 調(diào)整柱頭高度，測(cè)柱效填料被用于條件,，如有機(jī)溶劑
○ 檢查緩沖液,，選擇合適的緩沖液條件
4.怎樣避免由于樣品導(dǎo)致的壓力增大？
顆粒性物質(zhì)——堵塞濾膜和層析柱
○對(duì)于濾膜吸附較高的的樣品,，體積較小時(shí),，可以用離心代替過濾，比如10000g離心15分鐘
○ 細(xì)胞裂解液可50000g離心30分鐘
○ 可以使用醋酸纖維素膜或者PVDF膜,，其對(duì)蛋白的非特異性吸附較低
○ 選擇合適孔徑的濾器
沉淀或者聚體堵塞層析柱
○ 過濾
○ 通過改變pH,，加鹽或添加劑穩(wěn)定樣品或減少聚體產(chǎn)生
○ 避免機(jī)械壓力和過高的蛋白濃度
核酸——過高粘度可能會(huì)封閉填料上的配基
○ 加入核酸酶
○ 使用硫酸鏈霉素，聚乙烯亞胺或硫酸魚精蛋白沉淀
脂類——可能封閉填料上的配基或堵塞濾膜和層析柱
○ 離心
○ 使用硫酸銨,，硫酸葡聚糖或PVP沉淀
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