寵物檢測(cè)熒光PCR是一種基于DNA復(fù)制和擴(kuò)增的技術(shù),，其適用于檢測(cè)特定序列的DNA,，并從中獲得更多或全部的DNA。PCR可以在短時(shí)間內(nèi)產(chǎn)生大量純的,、具有特定序列的DNA分子,，是現(xiàn)代分子生物學(xué)的基礎(chǔ)技術(shù)之一。而熒光PCR則是一種在傳統(tǒng)聚合酶鏈反應(yīng)的基礎(chǔ)上加入熒光探針以實(shí)現(xiàn)更準(zhǔn)確的檢測(cè)方法,。
原理是這樣的：先需要收集需要檢測(cè)的寵物樣本,，如口腔拭子,、血液或組織等樣本。然后需要使用熱解法將其中的DNA裂解,，使其變?yōu)閱捂?。接著添加兩個(gè)特異性引物單元，即“前向引物”和“反向引物”,，并加入熒光探針,，該探針含有一個(gè)熒光染料和一個(gè)淬滅染料，可以與細(xì)胞外核酸(GC)結(jié)合,。當(dāng)引物與模板相互作用時(shí),，在3'端區(qū)域上進(jìn)行擴(kuò)增，此時(shí)探頭發(fā)生水解,，導(dǎo)致熒光染料從淬滅染料釋放,，并且發(fā)生熒光信號(hào)釋放，以此來(lái)檢測(cè)PCR反應(yīng)產(chǎn)物,?？梢酝ㄟ^(guò)實(shí)驗(yàn)室設(shè)備觀察PCR反應(yīng)體系中熒光信號(hào)變化的趨勢(shì)，即可對(duì)樣品DNA進(jìn)行定量或定性分析,。
利用特定引物擴(kuò)增所有目標(biāo)區(qū)域內(nèi)存在的DNA,，引物的設(shè)計(jì)根據(jù)目標(biāo)序列的基本信息選擇合適的引物序列，使其在PCR過(guò)程中,，能夠按照特定規(guī)則穩(wěn)定地結(jié)合到待擴(kuò)增模板的特定位置上,。與普通PCR不同，熒光PCR選用帶有熒光生物素標(biāo)簽的引物,，可以將擴(kuò)增的目標(biāo)串聯(lián)片段和引物結(jié)合成一個(gè)分子,。通過(guò)Real-timePCR系統(tǒng)可以同時(shí)進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)和融合曲線分析。這樣,，在后期的熒光檢測(cè)過(guò)程中,，就可以對(duì)所擴(kuò)增目標(biāo)片段的數(shù)量進(jìn)行準(zhǔn)確的定量。
寵物檢測(cè)熒光PCR技術(shù)的其他優(yōu)勢(shì)還包括：
高度靈敏性：可以從非常小的樣本量開(kāi)始擴(kuò)增,，探測(cè)樣本中確定污染,，擴(kuò)增低拷貝的模版。
高速度：相比傳統(tǒng)PCR技術(shù),，不需要進(jìn)行后續(xù)電泳與染色分析,，可以在更短的時(shí)間內(nèi)完成檢測(cè)。
高熱穩(wěn)定性引物和熒光探針被特意設(shè)計(jì),，確保了其在高溫下不會(huì)失活或降解,。
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