實驗原理

維生素C是人類營養(yǎng)中zui重要的維生素之一，缺少它時會產(chǎn)生壞血病,，因此又稱為抗壞血酸（ascorbic acid）,。它對物質(zhì)代謝的調(diào)節(jié)具有重要的作用。近年來,，發(fā)現(xiàn)它還有增強機體對腫瘤的抵抗力,，并具有化學(xué)致癌物的阻斷作用。

維生素C主要存在于新鮮水果及蔬菜中,。水果中以獼猴桃含量zui多,，在檸檬、桔子和橙子中含量也非常豐富,；蔬菜以辣椒中的含量zui豐富,，在番茄,、甘藍(lán)、蘿卜,、青菜中含量也十分豐富,，野生植物以刺梨中的含量zui豐富，每100克中含2800毫克,，有“維生素C王”之稱,。維生素C為無色晶體，味酸,，溶于水及乙醇,，不耐熱，在堿性溶液中極不穩(wěn)定,，日光照射后易被氧化破壞,，有微量銅、鐵等重金屬離子存在時更易氧化分解,，干燥條件下較為穩(wěn)定,。故維生素C制劑應(yīng)放在干燥、低溫和避光處保存,；在烹調(diào)蔬菜時,，不宜燒煮過度并應(yīng)避免接觸堿和銅器。

維生素C具有很強的還原性,。它可分為還原性和脫氫型,。還原型抗壞血酸能還原染料 2,6-二氯酚靛酚（DCPIP）,，本身則氧化為脫氫型,。在酸性溶液中，2,6-二氯酚靛酚呈紅色,，還原后變?yōu)闊o色,。因此，當(dāng)用此染料滴定含有維生素C的酸性溶液時,，維生素C尚未全部被氧化前,，則滴下的染料立即被還原成無色。一旦溶液中的維生素C已全部被氧化時,，則滴下的染料立即使溶液變成粉紅色,。所以，當(dāng)溶液從無色變成微紅色時即表示溶液中的維生素C剛剛?cè)勘谎趸?，此時即為滴定終點,。如無其它雜質(zhì)干擾，樣品提取液所還原的標(biāo)準(zhǔn)染料量與樣品中所含還原型抗壞血酸量成正比,。

實驗試劑

1. 2%草酸溶液: 草酸2g溶于100mL蒸餾水中,。

2. 1%草酸溶液: 草酸1g溶于100mL蒸餾水中,。

3. 標(biāo)準(zhǔn)抗壞血酸溶液（1mg/mL）: 準(zhǔn)確稱取100mg純抗壞血酸（應(yīng)為潔白色，如變?yōu)辄S色則不能用）溶于1%草酸溶液中,，并稀釋至100mL,，貯于棕色瓶中，冷藏,。臨用前配制,。

4. 0.1% 2,6-二氯酚靛酚溶液: 250mg 2,6-二氯酚靛酚溶于150mL含有52mg NaHCO₃的熱水中，冷卻后加水稀釋至250mL,，貯于棕色瓶中冷藏（4℃）約可保存一周,。每次臨用時，以標(biāo)準(zhǔn)抗壞血酸溶液標(biāo)定,。

實驗設(shè)備

1. 錐形瓶100mL（′2）

2. 吸量管10mL（′1）

3. 容量瓶100mL（′1）,，250mL（′1）

4. 微量滴定管5mL（′1）

5. 研缽

6. 漏斗

7. 紗布

實驗材料

自選材料

實驗步驟

1. 提取

水洗干凈整株新鮮蔬菜或整個新鮮水果，用紗布或吸水紙吸干表面水分,。然后稱取 20g,，加入20mL 2%草酸，用研缽研磨,，四層紗布過濾,，濾液備用。紗布可用少量2%草酸洗幾次,，合并濾液,，濾液總體積定容至50mL。

2. 標(biāo)準(zhǔn)液滴定

準(zhǔn)確吸取標(biāo)準(zhǔn)抗壞血酸溶液1mL置100mL錐形瓶中,，加9mL 1%草酸,，用微量滴定管以0.1% 2,6-二氯酚靛酚溶液滴定至淡紅色，并保持15s不褪色,，即達(dá)終點。由所用染料的體積計算出1mL染料相當(dāng)于多少毫克抗壞血酸（取10mL 1%草酸作空白對照,，按以上方法滴定）,。

3. 樣品滴定

準(zhǔn)確吸取濾液兩份，每份10mL, 分別放入2個錐形瓶內(nèi),，滴定方法同前,。另取10mL 1%草酸作空白對照滴定。

4. 計算

式中：VA為滴定樣品所耗用的染料的平均毫升數(shù),；

VB為滴定空白對照所耗用的染料的平均毫升數(shù),；

C為樣品提取液的總毫升數(shù)；

D為滴定時所取的樣品提取液毫升數(shù),；

T為1mL染料能氧化抗壞血酸毫克數(shù)（由操作二計算出）,；

W為待測樣品的重量（g）,。

注意事項

1. 某些水果、蔬菜（如橘子,、西紅柿等）漿狀物泡沫太多,，可加數(shù)滴丁醇或辛醇。

2. 整個操作過程要迅速,，防止還原型抗壞血酸被氧化,。滴定過程一般不超過2min。滴定所用的染料不應(yīng)小于1mL或多于4mL,，如果樣品含維生素C太高或太低時,，可酌情增減樣液用量或改變提取液稀釋度。

3. 提取的漿狀物如不易過濾,，亦可離心,，留取上清液進(jìn)行滴定。