上海亨代勞商貿(mào)有限公司主要從事實驗室設(shè)備，免疫學,、分子生物學和常規(guī)生化試劑的研發(fā),、銷售。并代理銷售多個國外，致力于為廣大高校,、科研院所和企事業(yè)單位提供*的科研試劑和完善的技術(shù)服務(wù),。咨詢.
                     ：, 60536361，60526763
                                      ,，.

體內(nèi)多數(shù)器官含有一定濃度的溶菌酶,，但腎臟和脾臟的含量較多。單核細胞與巨噬細胞的溶菌酶位于細胞表面,，故其釋放活躍,，而嗜中性粒細胞的溶菌酶位于胞漿深層，只在細胞裂解時才釋放出來,。正常人尿中無溶菌酶,。某些疾病患者血清或體液內(nèi)的溶菌酶活性值有顯著差別，故測定溶菌酶日益受到臨床重視,。溶菌酶為正常機體免疫防御機制的組成部分,，因具有溶解細菌細胞壁的作用而得名。在人體內(nèi),，它存在于嗜中性粒細胞,、單核細胞和巨噬細胞內(nèi)；也存在于粘膜分泌液中,，成為體表防御因素之一。

1．原理 根據(jù)溶菌酶能使革蘭陽性菌細胞壁溶解,，尤其是對腐生菌,，如溶壁微球菌（M．1ysodeikticus）zui為敏感，故常以溶解溶壁微球菌為指標,，對溶菌酶的活性值進行測定,。常用的方法有瓊脂平板法與比濁法。新近還根據(jù)免疫擴散法中抗原抗體反應(yīng)的原理而建立了溶菌酶免疫測定法,，由測酶活性改測酶含量,，初步探討認為此法具有特異、靈敏,、準確等優(yōu)點?，F(xiàn)將三種方法分別介紹如下。

2．實驗方法
（1）瓊脂平板法 用0．067mol／L,，pH6．4 PBS將瓊脂配成1％濃度,，加溫溶解后加50mg／100mL溶壁微球菌菌粉混合制成平皿，凝固后打成直徑2mm的小孔,。分別加溶菌酶標準應(yīng)用液及標本20gL,，置37℃擴散18h,，用卡尺測溶菌區(qū)域直徑，根據(jù)標準液濃度和溶菌環(huán)直徑用半對數(shù)表制成檢量線,，查標準曲線求檢品溶菌酶活性值,。

（2）比濁測定法 取溶菌酶標準應(yīng)用液（5、10,、15,、20、50ug／mL）及標本各0．1mL分加至試管,，每管加基質(zhì)液6mL（溶壁微球菌基質(zhì)液240mg／L）混勻,，置37℃水浴10min，立即混懸,，用600mn波長測A值,，以溶壁微球菌濁度的變化在標準曲線上查出溶菌酶的活性
值。

（3）免疫測定法 ①免疫單擴散板制備：將單價特異性兔抗人溶菌酶抗體加入1％瓊脂糖液中（50℃）,，制成含5％抗血清凝膠板,，用打孔器打成直徑為3mm的小孔，當天使用,；②溶菌酶免疫測定：將10btL標本加于免疫擴散板的小孔中,，保持濕度在室溫下反應(yīng)，當沉淀環(huán)達zui大限度后,，用帶測微計的放大鏡讀其直徑,，以直徑的平方在標準曲線上查出溶菌酶的相應(yīng)濃度；③標準曲線制備：取溶菌酶lmg溶于0．05mol／L,，pH6．4PBSlmL中，配制成5,、10,、20,、40、80,、100,、200,、300／lS／mL 8種濃度,，分別加人免疫擴散板小孔中,，經(jīng)反應(yīng)后,，以沉淀環(huán)直徑的平方為橫坐標，溶菌酶濃度為縱坐標,，繪制標準曲線,。

3．正常參考值與臨床意義 正常人尿液和腦脊液（CSF）中溶菌酶為0；血清中溶菌酶正常參考值：比濁法為11．80±2．2mz／L,；平板法為20．40±2．70mg／L,；免疫測定法為10—40mz／L（X±2S）。由于方法與實驗條件不同,，測定結(jié)果有差別,，故各實驗室應(yīng)建立自己的正常參考值,。

血清溶菌酶測定對鑒別各型急性白血病有一定意義,。急粒及急單血清溶菌酶升高；而急淋,、急性紅白血病降低或正常,；經(jīng)化療奏效病情緩解后，溶菌酶水平可恢復,。血清溶菌酶測定可作為判斷局限性腸炎活動性的一個有用的指標,，并且有助于判斷臨床過程的嚴重程度和對治療的反應(yīng)。

尿內(nèi)溶菌酶含量增高的原因有：①腎小管損害,；②高溶菌酶血癥,；③腎組織破壞。臨床上測定尿溶菌酶主要是作為腎小管損害的一個指標,，各種原因的腎小管損害都可引起尿溶菌酶含量增高,。腎移植病人定期檢查尿溶菌酶活性十分必要，如移植腎接受良好,，則溶菌酶活性在7d內(nèi)恢復正常,；若尿中過多的溶菌酶持續(xù)存在，必須疑及排斥反應(yīng)的發(fā)生,。

細菌性腦膜炎患者CSF溶菌酶含量遠較病毒性腦膜炎患者的含量高,，因此，CSF溶菌酶測定對二者的鑒別有重要意義,。此外,，CSF溶菌酶測定對中樞神經(jīng)系統(tǒng)的原發(fā)性或繼發(fā)性腫瘤有一定輔助診斷價值。