ELISA試驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在臨床上得到了廣泛的應(yīng)用,，但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)試驗(yàn)的檢測(cè)效果影響較大,，如不注意，有可能導(dǎo)致顯色不全,、花板等結(jié)果,。我將操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下，以期給同行帶來一些啟發(fā),，提高試驗(yàn)質(zhì)量,。
下面分析Elisa試驗(yàn)操作中可能影響結(jié)果的原因，并給出相應(yīng)的解決辦法
1 選擇試劑 選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測(cè)試劑,，嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作,，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
2 加樣 可能原因： 1）血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣,； 2）手工操作中,，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過長（特別是室內(nèi)溫度較高時(shí)）； 3）加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外,。解決辦法： 1） 標(biāo)本為血清：將血液先自然存放1-2小時(shí)后,，再用3000rmp離心15分鐘；標(biāo)本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管,，采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次,，放置一段時(shí)間后，3000rpm離心15分鐘,；若在幾天內(nèi)檢測(cè),，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存,，則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi),。 2） 加樣后及時(shí)放入孵箱。 3） 加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干,。 4） 如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣,，選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑,。 5） 標(biāo)本較多時(shí)，請(qǐng)分批操作,。
3 孵育 可能原因： 1） 孵育時(shí)未貼封片或加蓋,，使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁,，難于清洗*,； 2） 孵育時(shí)間人為延長，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,，難以清洗*,。解決辦法： 1） 貼封片或加蓋； 2） 按說明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間,。
4 洗板 可能原因： 1） 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉,。 2） 采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí)，洗液量不足,，導(dǎo)致洗板不*,；洗板針堵塞，抽吸不*,；洗板不暢,，導(dǎo)致洗板效果差。 3） 反應(yīng)板過多造成洗板等待時(shí)間長,。 解決辦法： 1） 保證洗液注滿各孔,，洗板針暢通，洗完板后在吸水紙（選擇干凈,、無或少塵的吸水材料）上輕輕拍干,； 2） 合理安排，或多用幾臺(tái)洗板機(jī),。
5 顯色 可能原因： 1） 顯色劑配制后放置時(shí)間過長或使用過期顯色劑,； 2） 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。解決辦法： 1） 顯色劑盡量在臨用前配制,，堅(jiān)持不用過期顯色劑,，肉眼可見淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用； 2） 加樣時(shí)保持顯色劑不外流,； 3） A,、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。
6 終止 可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡,，導(dǎo)致假陽性增加。所以在加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡,。
7 讀板 如讀板時(shí)板底不清潔等,。應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔,。
所以在整個(gè)操作過程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 盡可能實(shí)現(xiàn)ELISA檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)化，有效提高檢測(cè)質(zhì)量,。
在實(shí)際操作中,，除了選擇優(yōu)良試劑外，必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作,，同時(shí)作好室內(nèi)質(zhì)控,、室間質(zhì)評(píng)，以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測(cè)每一份標(biāo)本,，才能保證檢測(cè)質(zhì)量?，F(xiàn)在國內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動(dòng)酶標(biāo)儀，這對(duì)于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè),、提高檢測(cè)質(zhì)量起到了重要作用,。