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大鼠Ⅳ型膠原(Col Ⅳ)定量檢測試劑盒(ELISA)使用說明書

時間:2010-11-22閱讀:318
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本公司專業(yè)供應Elisa試劑盒,,種屬齊全,現(xiàn)貨,,質(zhì)量有保證,。
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大鼠型膠原(Col Ⅳ)定量檢測試劑盒(ELISA

使用說明書

【大鼠型膠原(Col Elisa試劑盒試劑盒名稱】

大鼠型膠原(Col Ⅳ)定量檢測試劑盒(ELISA

【大鼠型膠原(Col Elisa試劑盒試劑盒用途

定量檢測大鼠血清,、血漿及相關液體樣本中型膠原(Col Ⅳ的含量,。

【大鼠型膠原(Col Elisa試劑盒檢測原理

本試劑盒采用雙抗體兩步夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)。將標準品,、待測樣本加入到預先包被大鼠型膠原(Col Ⅳ單克隆抗體透明酶標包被板中,,溫育足夠時間后,洗滌除去未結(jié)合的成分,,再加入酶標工作液,,溫育足夠時間后,洗滌除去未結(jié)合的成分,。依次加入底物A,、B,底物(TMB)在辣根過氧化物酶(HRP)催化下轉(zhuǎn)化為藍色產(chǎn)物,,在酸的作用下變成黃色,,顏色的深淺與樣品中大鼠型膠原(Col Ⅳ)濃度呈正相關,450nm波長下測定OD值,,根據(jù)標準品和樣品的OD值,,計算樣本中大鼠型膠原(Col Ⅳ含量。

【大鼠Ⅳ型膠原(Col Ⅳ)Elisa試劑盒試劑盒組成

1

酶標包被板

12×8

7

顯色劑A

6mL

2

標準品

0.3mL×6

8

顯色劑B

6mL

3

20倍濃縮洗滌液

25mL

9

終止液

6mL

4

樣本稀釋液

6mL

10

說明書

1

5

特殊稀釋液

6mL

11

封板膜

2

6

酶標試劑

6mL

12

密封袋

1

備注:標準品(16號)濃度依次為:80,、40,、2010,、5,、2.5 μg/L

【大鼠Ⅳ型膠原(Col Ⅳ)Elisa試劑盒需要而未提供的試劑和器材

137恒溫箱

2、標準規(guī)格酶標儀

3,、精密移液器及一次性吸頭

4,、蒸餾水

5、一次性試管

6,、吸水紙

【大鼠Ⅳ型膠原(Col Ⅳ)Elisa試劑盒操作步驟】

1,、準備:從冰箱取出試劑盒,室溫復溫平衡30分鐘,。

2,、配液:用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。

3,、加標準品和待測樣本:取足夠數(shù)量的酶標包被板,,固定于框架上,分別設置標準品孔,、待測樣本孔和空白對照孔,,記錄各孔位置,在標準品孔中加入標準品50μL,;待測樣本孔中先加入待測樣本10μL,,再加樣本稀釋液40μL(即樣本稀釋5倍);空白對照孔不加,。

4,、溫育:37水浴鍋或恒溫箱溫育30min

5,、洗板:棄去液體,吸水紙上拍干,,每孔加滿洗滌液,,靜置1min,甩去洗滌液,,吸水紙上拍干,,如此重復洗板4次(也可用洗板機按說明書操作洗板)。

6,、加酶標工作液:每孔加入酶標工作液50μL,,空白對照孔不加。

7,、溫育:37水浴鍋或恒溫箱溫育30min,。

8、洗板:棄去液體,,吸水紙上拍干,,每孔加滿洗滌液,靜置1min,,甩去洗滌液,,吸水紙上拍干,,如此重復洗板4次(也可用洗板機按說明書操作洗板)。

9,、顯色:每孔先加入顯色劑A 50μL,,再加入顯色劑B 50μL,,平板混勻器混勻30s(或用手輕輕震蕩混勻30s),,37避光顯色15min

10,、終止:取出酶標板,,每孔加終止液50μL,,終止反應(顏色由藍色立轉(zhuǎn)黃色)。

11,、測定:以空白孔調(diào)零,,在終止后15分鐘內(nèi),用450nm波長測量各孔的吸光值(OD值),。

12,、計算:根據(jù)標準品的濃度及對應的OD值,計算出標準曲線的直線回歸方程,,再根據(jù)樣本的OD值,,在回歸方程上計算出對應的樣品濃度,也可以使用各種應用軟件來計算,。zui終濃度為實際測定濃度乘以稀釋倍數(shù),。

【大鼠Ⅳ型膠原(Col Ⅳ)Elisa試劑盒樣本要求】

1、樣本不能含疊氮鈉(NaN3,,因為疊氮鈉(NaN3)是辣根過氧化物酶(HRP)的抑制劑。

2,、標本采集后盡早進行提取,,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗,。若不能立即試驗,,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融,。

3,、樣本應充分離心,不得有溶血及顆粒,。

【大鼠Ⅳ型膠原(Col Ⅳ)Elisa試劑盒注意事項】

1,、實驗嚴格按照說明書的操作進行,實驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準。

2,、酶標包被板開封后如未用完,應立即裝入密封袋中加干燥劑保存,。

3,、建議所有的標準品,、樣本和空白對照都做雙份檢測,取平均值,,以減小實驗誤差。

4,、牢記樣本已經(jīng)稀釋5倍,計算結(jié)果乘以5才是樣本實際濃度,。

5、本試劑盒定量范圍為2.5-80μg/L,,超過此范圍,,為標準曲線延伸計算所得,不做為準確定量結(jié)果,,請用特殊稀釋液稀釋后測定準確結(jié)果(2.5-80μg/L范圍內(nèi)),,乘以總稀釋倍數(shù)即為樣本zui終濃度。

6,、若顯色過淺,可適當延長底物溫育時間,。

7、為避免交叉污染,,標準品,、樣本和空白對照每加一個就要更換一次吸頭;酶標工作液,、樣本稀釋液和底物等公共組分,,要懸臂加樣,不得碰到微孔,;不得重復使用封板膜,。

8、試劑盒保質(zhì)期內(nèi)使用,不同批號的試劑不得混用,。

9,、底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下,。

【大鼠Ⅳ型膠原(Col Ⅳ)Elisa試劑盒操作程序總結(jié)】

準備試劑,,樣品和標準品


 

加入準備好的樣品和標準品,37反應30分鐘

洗板4次,,加入酶標試劑,,37反應30分鐘

洗板4次,加入顯色液A,、B,,37顯色15分鐘

加入終止液

15分鐘之內(nèi)讀OD

計算

【大鼠Ⅳ型膠原(Col Ⅳ)Elisa試劑盒檢測范圍

2.5μg/L - 80μg/L

【大鼠Ⅳ型膠原(Col Ⅳ)Elisa試劑盒規(guī)格】

96人份/

【大鼠Ⅳ型膠原(Col Ⅳ)Elisa試劑盒貯藏】

2-8,避光防潮保存,。

【大鼠Ⅳ型膠原(Col Ⅳ)Elisa試劑盒有效期】

6個月

 

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