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大鼠Ⅳ型膠原（Col Ⅳ）定量檢測試劑盒（ELISA）

使用說明書

【大鼠Ⅳ型膠原（Col Ⅳ）Elisa試劑盒試劑盒名稱】

大鼠Ⅳ型膠原（Col Ⅳ）定量檢測試劑盒（ELISA）

【大鼠Ⅳ型膠原（Col Ⅳ）Elisa試劑盒試劑盒用途】

定量檢測大鼠血清,、血漿及相關液體樣本中Ⅳ型膠原（Col Ⅳ）的含量,。

【大鼠Ⅳ型膠原（Col Ⅳ）Elisa試劑盒檢測原理】

本試劑盒采用雙抗體兩步夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）。將標準品,、待測樣本加入到預先包被大鼠Ⅳ型膠原（Col Ⅳ）單克隆抗體透明酶標包被板中,，溫育足夠時間后，洗滌除去未結(jié)合的成分,，再加入酶標工作液,，溫育足夠時間后，洗滌除去未結(jié)合的成分,。依次加入底物A,、B，底物（TMB）在辣根過氧化物酶（HRP）催化下轉(zhuǎn)化為藍色產(chǎn)物,，在酸的作用下變成黃色,，顏色的深淺與樣品中大鼠Ⅳ型膠原（Col Ⅳ）濃度呈正相關，450nm波長下測定OD值,，根據(jù)標準品和樣品的OD值,，計算樣本中大鼠Ⅳ型膠原（Col Ⅳ）含量。

【大鼠Ⅳ型膠原（Col Ⅳ）Elisa試劑盒試劑盒組成】

備注：標準品（1號→6號）濃度依次為：80,、40,、20、10,、5,、2.5 μg/L

【大鼠Ⅳ型膠原（Col Ⅳ）Elisa試劑盒需要而未提供的試劑和器材】

1、37℃恒溫箱

2、標準規(guī)格酶標儀

3,、精密移液器及一次性吸頭

4,、蒸餾水

5、一次性試管

6,、吸水紙

【大鼠Ⅳ型膠原（Col Ⅳ）Elisa試劑盒操作步驟】

1,、準備：從冰箱取出試劑盒，室溫復溫平衡30分鐘,。

2,、配液：用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。

3,、加標準品和待測樣本：取足夠數(shù)量的酶標包被板,，固定于框架上，分別設置標準品孔,、待測樣本孔和空白對照孔,，記錄各孔位置，在標準品孔中加入標準品50μL,；待測樣本孔中先加入待測樣本10μL,，再加樣本稀釋液40μL（即樣本稀釋5倍）；空白對照孔不加,。

4,、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。

5,、洗板：棄去液體，吸水紙上拍干,，每孔加滿洗滌液,，靜置1min，甩去洗滌液,，吸水紙上拍干,，如此重復洗板4次（也可用洗板機按說明書操作洗板）。

6,、加酶標工作液：每孔加入酶標工作液50μL,，空白對照孔不加。

7,、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min,。

8、洗板：棄去液體,，吸水紙上拍干,，每孔加滿洗滌液，靜置1min,，甩去洗滌液,，吸水紙上拍干,，如此重復洗板4次（也可用洗板機按說明書操作洗板）。

9,、顯色：每孔先加入顯色劑A 液50μL,，再加入顯色劑B液 50μL,，平板混勻器混勻30s（或用手輕輕震蕩混勻30s）,，37℃避光顯色15min。

10,、終止：取出酶標板,，每孔加終止液50μL,，終止反應（顏色由藍色立轉(zhuǎn)黃色）。

11,、測定：以空白孔調(diào)零,，在終止后15分鐘內(nèi)，用450nm波長測量各孔的吸光值（OD值）,。

12,、計算：根據(jù)標準品的濃度及對應的OD值，計算出標準曲線的直線回歸方程,，再根據(jù)樣本的OD值,，在回歸方程上計算出對應的樣品濃度，也可以使用各種應用軟件來計算,。zui終濃度為實際測定濃度乘以稀釋倍數(shù),。

【大鼠Ⅳ型膠原（Col Ⅳ）Elisa試劑盒樣本要求】

1、樣本不能含疊氮鈉（NaN₃）,，因為疊氮鈉（NaN₃）是辣根過氧化物酶（HRP）的抑制劑。

2,、標本采集后盡早進行提取,，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗,。若不能立即試驗,，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融,。

3,、樣本應充分離心，不得有溶血及顆粒,。

【大鼠Ⅳ型膠原（Col Ⅳ）Elisa試劑盒注意事項】

1,、實驗嚴格按照說明書的操作進行，實驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準。

2,、酶標包被板開封后如未用完，應立即裝入密封袋中加干燥劑保存,。

3,、建議所有的標準品,、樣本和空白對照都做雙份檢測，取平均值,，以減小實驗誤差。

4,、牢記樣本已經(jīng)稀釋5倍，計算結(jié)果乘以5才是樣本實際濃度,。

5、本試劑盒定量范圍為2.5-80μg/L,，超過此范圍,，為標準曲線延伸計算所得，不做為準確定量結(jié)果,，請用特殊稀釋液稀釋后測定準確結(jié)果（2.5-80μg/L范圍內(nèi)）,，乘以總稀釋倍數(shù)即為樣本zui終濃度。

6,、若顯色過淺，可適當延長底物溫育時間,。

7、為避免交叉污染,，標準品,、樣本和空白對照每加一個就要更換一次吸頭；酶標工作液,、樣本稀釋液和底物等公共組分,，要懸臂加樣，不得碰到微孔,；不得重復使用封板膜,。

8、試劑盒保質(zhì)期內(nèi)使用，不同批號的試劑不得混用,。

9,、底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下,。

【大鼠Ⅳ型膠原（Col Ⅳ）Elisa試劑盒操作程序總結(jié)】

準備試劑,，樣品和標準品

加入準備好的樣品和標準品，37℃反應30分鐘

洗板4次,，加入酶標試劑,，37℃反應30分鐘

洗板4次，加入顯色液A,、B,，37℃顯色15分鐘

加入終止液

15分鐘之內(nèi)讀OD值

計算

【大鼠Ⅳ型膠原（Col Ⅳ）Elisa試劑盒檢測范圍】

2.5μg/L - 80μg/L

【大鼠Ⅳ型膠原（Col Ⅳ）Elisa試劑盒規(guī)格】

96人份/盒

【大鼠Ⅳ型膠原（Col Ⅳ）Elisa試劑盒貯藏】

2-8℃，避光防潮保存,。

【大鼠Ⅳ型膠原（Col Ⅳ）Elisa試劑盒有效期】

6個月