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小鼠游離脂肪酸(FFA)定量檢測試劑盒(ELISA)使用說明書

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本公司專業(yè)供應Elisa試劑盒,,種屬齊全,現(xiàn)貨,,質量有保證,。
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小鼠游離脂肪酸(FFA)定量檢測試劑盒(ELISA

使用說明書

【小鼠游離脂肪酸(FFAElisa試劑盒試劑盒名稱】

小鼠游離脂肪酸(FFA)定量檢測試劑盒(ELISA

【小鼠游離脂肪酸(FFAElisa試劑盒試劑盒用途

定量檢測小鼠血清,、血漿及相關液體樣本中游離脂肪酸(FFA的含量,。

【小鼠游離脂肪酸(FFAElisa試劑盒檢測原理

本試劑盒采用雙抗體兩步夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)。將標準品,、待測樣本加入到預先包被小鼠游離脂肪酸(FFA單克隆抗體透明酶標包被板中,溫育足夠時間后,,洗滌除去未結合的成分,,再加入酶標工作液,溫育足夠時間后,,洗滌除去未結合的成分,。依次加入底物AB,,底物(TMB)在辣根過氧化物酶(HRP)催化下轉化為藍色產(chǎn)物,,在酸的作用下變成黃色,,顏色的深淺與樣品中小鼠游離脂肪酸(FFA濃度呈正相關,,450nm波長下測定OD值,,根據(jù)標準品和樣品的OD值,計算樣本中小鼠游離脂肪酸(FFA含量,。

【小鼠游離脂肪酸(FFAElisa試劑盒試劑盒組成

1

酶標包被板

12×8

7

顯色劑A

6mL

2

標準品

0.3mL×6

8

顯色劑B

6mL

3

20倍濃縮洗滌液

25mL

9

終止液

6mL

4

樣本稀釋液

6mL

10

說明書

1

5

特殊稀釋液

6mL

11

封板膜

2

6

酶標試劑

6mL

12

密封袋

1

備注:標準品(16號)濃度依次為:640320,、160,、80,、4020μmol/L.

【小鼠游離脂肪酸(FFAElisa試劑盒需要而未提供的試劑和器材

1,、37恒溫箱

2,、標準規(guī)格酶標儀

3、精密移液器及一次性吸頭

4,、蒸餾水

5,、一次性試管

6、吸水紙

【小鼠游離脂肪酸(FFAElisa試劑盒操作步驟】

1,、準備:從冰箱取出試劑盒,,室溫復溫平衡30分鐘。

2,、配液:用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液,。

3、加標準品和待測樣本:取足夠數(shù)量的酶標包被板,,固定于框架上,,分別設置標準品孔、待測樣本孔和空白對照孔,,記錄各孔位置,,在標準品孔中加入標準品50μL;待測樣本孔中先加入待測樣本10μL,,再加樣本稀釋液40μL(即樣本稀釋5倍),;空白對照孔不加。

4,、溫育:37水浴鍋或恒溫箱溫育30min,。

5、洗板:棄去液體,,吸水紙上拍干,,每孔加滿洗滌液,靜置1min,,甩去洗滌液,,吸水紙上拍干,如此重復洗板4次(也可用洗板機按說明書操作洗板),。

6,、加酶標工作液:每孔加入酶標工作液50μL,空白對照孔不加,。

7,、溫育:37水浴鍋或恒溫箱溫育30min

8、洗板:棄去液體,,吸水紙上拍干,,每孔加滿洗滌液,靜置1min,,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,,如此重復洗板4次(也可用洗板機按說明書操作洗板),。

9、顯色:每孔先加入顯色劑A 50μL,,再加入顯色劑B 50μL,,平板混勻器混勻30s(或用手輕輕震蕩混勻30s),37避光顯色15min,。

10,、終止:取出酶標板,每孔加終止液50μL,,終止反應(顏色由藍色立轉黃色),。

11、測定:以空白孔調零,,在終止后15分鐘內,,用450nm波長測量各孔的吸光值(OD值)。

12,、計算:根據(jù)標準品的濃度及對應的OD值,,計算出標準曲線的直線回歸方程,再根據(jù)樣本的OD值,,在回歸方程上計算出對應的樣品濃度,,也可以使用各種應用軟件來計算。zui終濃度為實際測定濃度乘以稀釋倍數(shù),。

【小鼠游離脂肪酸(FFAElisa試劑盒樣本要求】

1,、樣本不能含疊氮鈉(NaN3,因為疊氮鈉(NaN3)是辣根過氧化物酶(HRP)的抑制劑,。

2,、標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,,提取后應盡快進行實驗,。若不能立即試驗,可將標本放于-20℃保存,,但應避免反復凍融,。

3、樣本應充分離心,不得有溶血及顆粒,。

【小鼠游離脂肪酸(FFAElisa試劑盒注意事項】

1,、實驗嚴格按照說明書的操作進行,實驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準,。

2,、酶標包被板開封后如未用完,應立即裝入密封袋中加干燥劑保存,。

3,、建議所有的標準品、樣本和空白對照都做雙份檢測,,取平均值,,以減小實驗誤差。

4,、牢記樣本已經(jīng)稀釋5倍,,計算結果乘以5才是樣本實際濃度。

5,、本試劑盒定量范圍為20-640μmol/L,,超過此范圍,為標準曲線延伸計算所得,,不做為準確定量結果,,請用特殊稀釋液稀釋后測定準確結果(20-640μmol/L范圍內),乘以總稀釋倍數(shù)即為樣本zui終濃度,。

6,、若顯色過淺,可適當延長底物溫育時間,。

7,、為避免交叉污染,標準品,、樣本和空白對照每加一個就要更換一次吸頭,;酶標工作液、樣本稀釋液和底物等公共組分,,要懸臂加樣,,不得碰到微孔;不得重復使用封板膜,。

8,、試劑盒保質期內使用,不同批號的試劑不得混用,。

9,、底物B對光敏感,,避免長時間暴露于光下。

【小鼠游離脂肪酸(FFAElisa試劑盒操作程序總結】

準備試劑,,樣品和標準品


 

加入準備好的樣品和標準品,,37反應30分鐘

洗板4次,加入酶標試劑,,37反應30分鐘

洗板4次,,加入顯色液AB,,37顯色15分鐘

加入終止液

15分鐘之內讀OD

計算

【小鼠游離脂肪酸(FFAElisa試劑盒檢測范圍

20μmol/L - 640μmol/L

【小鼠游離脂肪酸(FFAElisa試劑盒規(guī)格】

96人份/

【小鼠游離脂肪酸(FFAElisa試劑盒貯藏】

2-8,,避光防潮保存。

【小鼠游離脂肪酸(FFAElisa試劑盒有效期】

6個月

 

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