本公司專業(yè)供應Elisa試劑盒,,種屬齊全,,現貨,質量有保證,。
咨詢:,,
, ,
:www.hdl17.com http://hdlsw.testmart.cn
:[email protected] [email protected]
:1070885359 727675375
實驗原理本試劑盒應用雙抗體夾心酶標免疫分析法測定標本中CCK水平,。用純化的抗體包被微孔板,,制成固相抗體,,往包被單抗的微孔中依次加入CCK抗原,、生物素化的抗豬CCK抗體、HRP標記的親和素,,經過*洗滌后用底物TMB顯色,。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的CCK呈正相關,。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),,計算樣品濃度,。 2. 標準品(凍干品):2瓶,每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml,,蓋好后靜置10分鐘以上,,然后反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為1000 pmol/L,做系列倍比稀釋后,,分別稀釋成1000 pmol/L,,500 pmol/L ,,250 pmol/L,125 pmol/L,,62.5 pmol/L,,31.2 pmol/L,,15.6 pmol/L,其原液直接作為zui高標準濃度,,樣品稀釋液直接作為標準濃度0 pmol/L,臨用前15分鐘內配制,。 3. 溫育60分鐘后,,棄去孔內液體,甩干,,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,,350ul/每孔,甩干,。
4. 每孔加檢測溶液B工作液(同檢測A工作液) 100ul,,37℃,,60分鐘。
5. 溫育60分鐘后,,棄去孔內液體,甩干,,洗板5次,,每次浸泡1-2分鐘,350ul/每孔,,甩干,。
6. 依序每孔加底物溶液90ul,37℃避光顯色(30分鐘內,,此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,,后3-4孔梯度不明顯,即可終止),。
7. 依序每孔加終止溶液50ul,,終止反應(此時藍色立轉黃色),。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同,。為了保證實驗結果的準確性,,底物反應時間到后應盡快加入終止液。
8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值),。 在加終止液后15分鐘以內進行檢測,。
注:
1. 每次實驗留一孔作為空白調零孔,,該孔不加任何試劑,,只是zui后加底物溶液及2NH2SO4。測量時先用此孔調OD值至零,。
2.為防止樣品蒸發(fā),試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內,,酶標板加上蓋或覆膜。
3. 未使用完的酶標板或者試劑,,請于2-8℃保存。標準品,、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據所需的量配置使用,。請勿重復使用已稀釋過的標準品,、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液,。
4. 建議檢測樣品時均設雙孔測定,,以保證檢測結果的準確性,。
洗板方法
手工洗板方法:吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標板內的液體;在實驗臺上鋪墊幾層
吸水紙,,酶標板朝下用力拍幾次,;將推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內,,浸泡1-2分鐘,,根據需要,,重復此過程數次,。
自動洗板:如果有自動洗板機,應在熟練使用后再用到正式實驗過程中,。
特異性
本試劑盒可同時檢測重組或天然的豬CCK,,且與其它相關蛋白無交叉反應,。
計算
以標準物的濃度為橫坐標(對數坐標),OD值為縱坐標(普通坐標),,在半對數坐標紙上繪出標準曲線,,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度,;再乘以稀釋倍數,;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,,將樣品的OD值代入方程式,,計算出樣品濃度,,再乘以稀釋倍數,,即為樣品的實際濃度,。
注意事項
1. 洗滌過程非常重要,,不充分的洗滌易造成假陽性,。
2. 一次加樣時間控制在5分鐘內,如標本數量多,,推薦使用排槍加樣,。
3. 請每次測定的同時做標準曲線,,做復孔,。
4. 如標本中待測物質含量過高,,請先稀釋后再測定,,計算時請zui后乘以稀釋倍數,。
5.在配制標準品,、檢測溶液工作液時,請以相應的稀釋液配制,不能混淆,。
6.底物請避光保存,。
檢測范圍:
15.6 pmol/L -1000 pmol/L
說明
1.試劑盒保存:-20℃(較長時間不用時);2-8℃(頻繁使用時),。
2.有效期:6個月
3.濃洗滌液會有鹽析出,,稀釋時可在水浴中加溫助溶,。
4.剛開啟的酶聯(lián)板孔中可能會含有少許水樣物質,此為正?,F象,,不會對實驗結果造成任何影響。
5.中,、英文說明書可能會有不一致之處,,請以英文說明書為準