●取材和固定： 處死動(dòng)物后立即切取組織塊,，并快速投入固定液中,。
●脫水和透明：
８０％酒精（min）
９５％酒精Ⅰ（min）
９５％酒精Ⅱ（min）
*Ⅰ（min）
*Ⅱ（min）
二甲苯Ⅰ、Ⅱ（min）
<2mm
45-60
45-60
45-60
15-30
2-4mm
60-120
60-120
60-120
30
4-5mm
120-240
120-240
120-240
60
注意事項(xiàng)：1.脫水應(yīng)*,，否則材料不能透明,，影響石蠟的浸入，致使難以切片,。
2.在低濃度或純酒精中,，每級(jí)停留不宜太長(zhǎng),，否則易使組織變軟，助長(zhǎng)材料的解體,。
3.在高濃度或純酒精中,，每級(jí)停留的時(shí)間也不宜太長(zhǎng)，否則會(huì)使組織變脆,，影響切片,。
4.如需過夜，應(yīng)停留在70%酒精中,。
5.使用透明劑時(shí),，要隨時(shí)蓋緊蓋子，以免空氣中的水分進(jìn)入,。
●
浸蠟和包埋：
浸蠟：將透明的組織放入蠟杯（Ⅰ）→蠟杯（Ⅱ）→蠟杯（Ⅲ）,。浸蠟時(shí)間視材料大小而定，一般總的浸蠟時(shí)間為２－４小時(shí)左右,。
包埋：1. 組織浸入石蠟后,，包埋前將組織移入包埋用石蠟杯內(nèi)。從恒溫箱取出置于三角架上,，其下點(diǎn)燃酒精燈,，以保持石蠟的溶解狀態(tài)。
2.準(zhǔn)備好包埋框,，將包埋用的鑷子在酒精燈上加溫（防止鑷子粘蠟）后,，左手持蠟杯，右手把加溫的鑷子放在蠟口（直立狀）倒蠟時(shí)讓石蠟沿鑷子注入包埋框內(nèi),。
3.迅速鑷取組織塊放入包埋框石蠟內(nèi),，切面朝下放正置入框底并輕輕壓平，以保證不再有氣泡,。
4.待石蠟表面凝固前將標(biāo)簽貼于其上,，需注意勿使標(biāo)簽與標(biāo)本混淆，當(dāng)蠟塊冷至蠟面有透明蠟?zāi)r(shí),，浸入冷水中迅速使其冷卻,，否則蠟內(nèi)常形成結(jié)晶。
5.蠟塊*硬固后除去銅框,，以保證蠟*凝固,，立即修切，準(zhǔn)備制成切片或儲(chǔ)藏備用,。
●切片制作：
注意事項(xiàng)： 1.室溫過高時(shí),，可將修好的蠟塊放到冰箱中冷卻一定時(shí)間。在夏季時(shí)可用冰塊冷卻刀和組織塊，減少刀與組織塊在過程中產(chǎn)生的熱時(shí),，使石蠟保持合適的硬度以利于切片,。
2.切片經(jīng)30%的乙醇初展后，再用載玻片撈起蠟帶放入展片儀水盒內(nèi)（一般水溫為45℃左右）,。待蠟片帶中的組織展平后,，即可進(jìn)行分片和撈片。
3. 切片時(shí)要及時(shí)清潔刀口,、除去蠟屑,，否則易引起破碎。
●貼片：
待切片在恒溫水內(nèi)充分?jǐn)傞_展平后,，將載玻片垂直插入水中以毛面輕靠切片,，并用毛筆將切片一邊撥于玻片上，隨即將玻片直立提起,?？欤?/span>
●
烘片與脫蠟：
石蠟切片在90度烘箱內(nèi)烘半小時(shí)
經(jīng)二甲苯Ⅰ,、Ⅱ脫蠟各5-10min，然后放入100%,、95%,、90%、80%,、70%等各級(jí)酒精溶液中各3-5min,，再放入蒸餾水中3min。
●染色
1.將蒸餾水洗滌后的切片移入Harris蘇木精液中５－１０min,，使細(xì)胞核著色,。
2.用自來水洗去切片上殘余的染液。
3.將切片放入1%鹽酸乙醇液（鹽酸1份+70%乙醇100份）中褪色,，見切片變紅,，顏色較淺即可，約數(shù)秒至數(shù)十秒鐘,。
4.入１％氨水或自來水浸洗,，使之返藍(lán)。
5.在蒸餾水中浸片刻,。
6.０.５％伊紅酒精溶液中染色２－５min,，使細(xì)胞質(zhì)著色。
●脫水和透明：：
切片依次入９５％酒精（Ⅰ）→９５％酒精（Ⅱ）→*（Ⅰ）→*（Ⅱ）
→１：１*,、二甲苯→二甲苯（Ⅰ）→二甲苯（Ⅱ）,，各級(jí)中停留１－５min。
●封藏：
將切片從二甲苯（Ⅱ）中取出，用紙或布擦去材料周圍的二甲苯,。在材料中央滴一小滴樹膠,，然后，用鑷子加蓋蓋玻片,。切片封好后,，放在切片托盤上待干燥，即可用于觀察,。
