在ELISA中，用酶標(biāo)記的抗體或抗原統(tǒng)稱為結(jié)合物,，此為進(jìn)行ELISA檢測的關(guān)鍵試劑,。常規(guī)使用ELISA法的主要問題是能夠簡便地制備酶結(jié)合物，而此種制備好的酶結(jié)合物要求穩(wěn)定,，具有很高的酶活性,，抗原或抗體的特異性，產(chǎn)量高及成本低,。

    那么用什么樣的酶來標(biāo)記抗原或抗體呢,？

    1.酶制品的純度及活力高，催化效力也高,，放大倍數(shù)大(即一個酶分子能催化幾十幾百個底物分子發(fā)生反應(yīng)的酶),。

    2.酶及制備好的酶結(jié)合物在檢測或貯存中能保持穩(wěn)定。

    3.酶制劑易得,、價廉.

    4.既要適用于標(biāo)記抗原,，又適用于標(biāo)記抗體，標(biāo)記后不影響抗原或抗體的免疫學(xué)特性,，也不降低酶的活性,。

    5.酶的反應(yīng)產(chǎn)物穩(wěn)定，檢測時簡便,、快速,。在定量測定中產(chǎn)物必須是可溶性的。

    6.要有安全,、價廉,、易得的底物。

    符合上述條件的酶有：堿性磷酸酶,，一般用分子量為5×105(Alkaline Phospatase,簡稱AP),，辣根過氧化物酶(Horse Radish Peroxidase,簡稱HRP,分子量為4×104),另外尚有葡萄糖氧化酶，β-半乳糖甙酶,，糖化酶及乙酰膽堿酯酶等等,。其中以前兩種(AP和HRP)zui為常用。

    AP活力高,，制備好的酶結(jié)合物可加NaN3防腐,，但此種酶不易獲得，因其是從小牛腸粘膜中或大腸桿菌中提取,，而且價格比較昂貴,。因此，目前國內(nèi)外大多使用HRP,。HRP活性也高,，價格較便宜,。但制得酶結(jié)合物不能加NaN3防腐。因NaN3能抑制HRP的活性,，但可作低溫保存或加60%緩沖甘油等量混合后少量分裝,，保存冰箱，一般可用1-2年,。

   結(jié)合：用什么樣的方法將HRP與抗體球蛋白結(jié)合起來呢,？當(dāng)然不能用強(qiáng)烈的方法，因為強(qiáng)烈的方法會使酶和抗體失去活性,。故只能用溫和的方法把酶和抗體結(jié)合起來,。因此，必須使用結(jié)合劑,。理想的結(jié)合劑應(yīng)具備下列條件：

1.不影響酶及抗體活性,；

2.不產(chǎn)生干擾物質(zhì)；

3.抗體和酶結(jié)合后應(yīng)有較高的產(chǎn)量,；

4.不出現(xiàn)非特異性反應(yīng),；

5.結(jié)合程序簡便；

6.來源易,、價廉,。

目前常用的有戊二醛和過碘酸鈉二種。由于對所使用結(jié)合劑的針對性,，因此標(biāo)記的方法也有戊二醛交聯(lián)法和過碘酸鈉氧化法兩類,。