在ELISA中，用酶標(biāo)記的抗體或抗原統(tǒng)稱為結(jié)合物,，此為進(jìn)行ELISA檢測(cè)的關(guān)鍵試劑,。常規(guī)使用ELISA法的主要問(wèn)題是能夠簡(jiǎn)便地制備酶結(jié)合物，而此種制備好的酶結(jié)合物要求穩(wěn)定,，具有很高的酶活性,，抗原或抗體的特異性，產(chǎn)量高及成本低,。

    那么用什么樣的酶來(lái)標(biāo)記抗原或抗體呢,？

    1.酶制品的純度及活力高，催化效力也高,，放大倍數(shù)大(即一個(gè)酶分子能催化幾十幾百個(gè)底物分子發(fā)生反應(yīng)的酶),。

    2.酶及制備好的酶結(jié)合物在檢測(cè)或貯存中能保持穩(wěn)定。

    3.酶制劑易得,、價(jià)廉.

    4.既要適用于標(biāo)記抗原,，又適用于標(biāo)記抗體，標(biāo)記后不影響抗原或抗體的免疫學(xué)特性,，也不降低酶的活性,。

    5.酶的反應(yīng)產(chǎn)物穩(wěn)定，檢測(cè)時(shí)簡(jiǎn)便,、快速,。在定量測(cè)定中產(chǎn)物必須是可溶性的。

    6.要有安全,、價(jià)廉,、易得的底物,。

    符合上述條件的酶有：堿性磷酸酶，一般用分子量為5×105(Alkaline Phospatase,簡(jiǎn)稱AP),，辣根過(guò)氧化物酶(Horse Radish Peroxidase,簡(jiǎn)稱HRP,分子量為4×104),另外尚有葡萄糖氧化酶,，β-半乳糖甙酶，糖化酶及乙酰膽堿酯酶等等,。其中以前兩種(AP和HRP)zui為常用,。

    AP活力高，制備好的酶結(jié)合物可加NaN3防腐,，但此種酶不易獲得,，因其是從小牛腸粘膜中或大腸桿菌中提取，而且價(jià)格比較昂貴,。因此,，目前國(guó)內(nèi)外大多使用HRP。HRP活性也高,，價(jià)格較便宜,。但制得酶結(jié)合物不能加NaN3防腐。因NaN3能抑制HRP的活性,，但可作低溫保存或加60%緩沖甘油等量混合后少量分裝,，保存冰箱，一般可用1-2年,。

   結(jié)合：用什么樣的方法將HRP與抗體球蛋白結(jié)合起來(lái)呢,？當(dāng)然不能用強(qiáng)烈的方法，因?yàn)閺?qiáng)烈的方法會(huì)使酶和抗體失去活性,。故只能用溫和的方法把酶和抗體結(jié)合起來(lái),。因此，必須使用結(jié)合劑,。理想的結(jié)合劑應(yīng)具備下列條件：

1.不影響酶及抗體活性,；

2.不產(chǎn)生干擾物質(zhì)；

3.抗體和酶結(jié)合后應(yīng)有較高的產(chǎn)量,；

4.不出現(xiàn)非特異性反應(yīng),；

5.結(jié)合程序簡(jiǎn)便；

6.來(lái)源易,、價(jià)廉,。

目前常用的有戊二醛和過(guò)碘酸鈉二種。由于對(duì)所使用結(jié)合劑的針對(duì)性,，因此標(biāo)記的方法也有戊二醛交聯(lián)法和過(guò)碘酸鈉氧化法兩類,。