如何利用ELISA篩選以及ELISA方法操作的注意事項有哪些呢？相信很多做實驗的小伙伴都有這樣的疑問，今天小編就給大家總結一下,，注意聽講哦！

ELISA,，全稱酶聯(lián)免疫吸附實驗,，主要利用的是抗原抗體特異性結合的特點，可分為直接法,、間接法,、雙抗體夾心法、競爭法等,。下面以間接法為例進行介紹：

1,、方陣ELISA。用途：①融合前后確定鼠血清中抗體效價,；②拿到單抗腹水后,，需要建立ELISA方法時首先要確定包被原及抗體的優(yōu)質(zhì)工作濃度。
經(jīng)典的方陣ELISA：將抗原和抗體各自稀釋成不同梯度濃度,，結果OD值P/N>2的均判為陽性,，選取OD值在1.0左右的那個Ag-Ab濃度為工作濃度，其主要原因與酶標儀靈敏度有關,。
但是,，對于抗原抗體而言,，由于它們被稀釋成不同濃度，那么在理論上,，每個抗原稀釋度情況下,，總有一個抗體的稀釋度其OD值在1.0左右，那么到底選取哪一個OD值1.0左右的好呢,？這就需要同時用藥物做個抑制來看,，哪個濃度下抑制情況好，就取哪個抗原抗體濃度做工作濃度,。

2,、間接競爭ELISA：在用方陣ELISA確定好抗原抗體醉佳結合濃度后就可以做間接競爭ELISA了，其目的主要是考察抗體的特異性,、繪制標準曲線,，計算抗體對抗原的半數(shù)抑制、檢測限等參數(shù),，也可以用來檢測未知樣品中的抗體,。方法是用確定的抗原包被，在加一抗時同時加入不同濃度的標準品（一般是藥物）,，然后加二抗,，顯色。用藥物（即標準品）濃度的對數(shù)為橫坐標,、抑制率為縱坐標,，繪制ELISA標準曲線，計算相關的參數(shù),，之后就可以將未知的樣品所測OD值代入曲線方程求其中抗體的含量,。通常這是建立ELISA檢測方法的*項目。

標準曲線可以繪成直線或是曲線（二次方程或三次方程）,。通常是選取線性比較好的幾個點繪成直線,。直線斜率越高說明抗體的特異性及靈敏性好，R2
值越靠近1,，則說明線性關系好,。曲線繪好后，有一些常用的參數(shù),，如抑制率,、半數(shù)抑制、檢測限,、定量限,、標準偏差、變異系數(shù)等等：

抑制率（%）＝1－B/B0（B0為不含藥物的OD值；B為含有藥物的OD值）
標準差（SD）＝[∑(Xi－B ) 2 / (n－1)] 1/2,；
標準偏差（RSD）＝SD/B
半數(shù)抑制：指用藥物（半抗原）去做競爭實驗時呈現(xiàn)50%抑制效果時的藥物濃度,。藥物濃度越低，而抑制率越高,，則表示抗體對藥物的特異性越好,，靈敏度也高。半數(shù)抑制濃度IC50對應的OD值：OD IC50＝0.5?B0
檢測下限（LOD）對應的OD值：ODLOD =B0－3SD,；
定量限（LOQ）對應的OD值：ODLOQ = B0－10SD,；

3、間接ELISA操作中具體注意的問題：
間接ELISA一般有6個步驟：包被抗原,、封閉,、加一抗（在做競爭時同時加入藥物）、加二抗,、顯色,、終止。其中除了加顯色和終止外,，其余步驟之間都要進行洗板,。在這里面，每一步都非常重要,，假如有一步疏忽都會造成結果的不準確。