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親和層析填料的應(yīng)用原理及其優(yōu)勢(shì)

時(shí)間:2024/5/14閱讀:624
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親和層析填料是根據(jù)生物分子間親和力具有專一性而設(shè)計(jì)的層析技術(shù),是生物大分子的生物學(xué)特異性,,這種專一性的親和力體現(xiàn)在,,激素和受體抗原和抗體,、酶蛋白和輔酶,、酶和酶抑制劑(或配體)等。以抗原和抗體為例,,在一定條件下,,抗原抗體能緊密地結(jié)合在一起形成復(fù)合物。將復(fù)合物的一方固定在不溶性載體上,,則可從溶液中專一地分離和提純另一方,。與其他純化方法相比,親和層析純化作用強(qiáng),,效果好,,最重要的是,純化速度快,,有時(shí)僅一步即可達(dá)到純化的目的。

親和層析填料具有三大優(yōu)點(diǎn):

1.純化步驟少,、純化純度高,。親和層析填料一種極為有效的分離蛋白質(zhì)的方法,通常情況下,,一步法即可達(dá)到純化的目的,,更為關(guān)鍵的是,純化的純度高,。  

2.對(duì)不穩(wěn)定蛋白純化更有利,。親和層析填料有效的進(jìn)行物質(zhì)純化,對(duì)生物分子吸附和分離具有選擇性,,純化倍數(shù),。同時(shí),在純化過程中,,蛋白得到濃縮,,結(jié)合到親和配基后,性質(zhì)更穩(wěn)定,,活性回收率更高,、純化步驟更少、純化時(shí)間更短,、對(duì)不穩(wěn)定蛋白的純化有利,。

3.分離效果優(yōu)良(較大容量載體同樣),。除特異性的吸附外,仍然會(huì)因分子的錯(cuò)誤認(rèn)別和分子間非選擇性的作用力而吸附一些雜蛋白質(zhì),,另外在洗脫過程中,,配體不可避免的脫落進(jìn)入分離體系。親和層析填料正確地選擇合適的配體和結(jié)合方式,,對(duì)獲得具有優(yōu)良分離效果和較大容量的載體同樣具有重要作用,。能與分離物質(zhì)牢固、特異和可逆結(jié)合的物質(zhì)都可以作為配體,。選擇配體有兩個(gè)條件:第一是生物大分子與配體間具有合適的親和力,,親和力太強(qiáng),洗脫條件劇烈,,易造成生物大分子失活,,親和力太小,解離容易,,結(jié)合率不高,。第二是配體要具有雙重功能,既有可牢固與載體結(jié)合的基團(tuán),,結(jié)合后又不影響生物大分子與配體間的親和力,。




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