考馬斯亮藍(lán)染色液正確的染色步驟

描述：
常規(guī)考馬斯亮藍(lán)SDS-PAGE凝膠蛋白質(zhì)染色是實驗室常用的凝膠染色方法。銀染方法雖然靈敏度高,，但所需試劑復(fù)雜并且有毒有害,，操作步驟繁瑣，難以控制獲得好的染色效果,。

考馬斯亮藍(lán)有G-250和R-250兩種,。
游離狀態(tài)的考馬斯亮藍(lán)G250 在酸性溶液中呈藍(lán)偏綠色，與蛋白質(zhì)結(jié)合后呈藍(lán)色,，蛋白質(zhì)含量與顏色的深淺成正比,，經(jīng)595nm 測定，可作出蛋白質(zhì)含量與吸光度值的標(biāo)準(zhǔn)曲線,，并求出未知樣品的蛋白質(zhì)濃度,。R-250呈藍(lán)色，有輕微紅色,。

染色步驟：
1. 此染色液即為工作液，使用時直接將聚丙烯酰胺凝膠放在培養(yǎng)皿中以考馬斯亮藍(lán)染色液覆蓋凝膠,，并緩慢搖動2h,；也可根據(jù)實際情況調(diào)整時間。
2. 傾去染色液,，用脫色液沖洗凝膠,。
3. 以脫色液覆蓋凝膠，緩慢搖動2h,，（或者根據(jù)時間情況調(diào)整脫色時間）傾去脫色液,，再加入新脫色液進(jìn)行脫色，直至獲得清晰的藍(lán)色的條帶和干凈的背景（通常此過程需要2～4h,，也可脫色過夜至清晰的藍(lán)色的條帶和干凈的背景）,。
4. 對凝膠進(jìn)行分析和照相，凝膠可放置在7％的乙酸中保存,。也可用凝膠干膠裝置（P2000）對凝膠進(jìn)行處理后保存,。

① 上樣緩沖液中包括甘油,溴酚藍(lán),SDS等,甘油主要作用是防止樣品漂浮出點樣孔,溴酚藍(lán)作為電泳指示劑,用來觀察電泳進(jìn)度,SDS用于一些核酸結(jié)合蛋白的變性解離.
②染色液與凝膠中核酸結(jié)合,以便于在紫外光下顯示核酸條帶.
loading buffer 的中文名字叫上樣緩沖液,，6kb的緩沖液中可以顯示兩條帶，前面的紫藍(lán)色的條帶是溴酚藍(lán),，在0.6%,、1%、1.4%和2%瓊脂糖凝膠電泳中,，溴酚蘭的遷移率分別與1Kb,、0.6Kb、0.2Kb和0.15Kb的雙鏈線性DNA片段大致相同,。
后面的藍(lán)色條帶是二甲苯氰,，它在1%和1.4%瓊脂糖中電泳時，其遷移速率分別與2Kb和1.6Kb的雙鏈線性DNA大致相似,。而對于PAGE膠他們的遷移速率也分別不同,。