Agilent 1100液相色譜儀,；DMX 500核磁共振儀,；正相 柱：Nucleosil 100 Silica 5  ,，250 lnln×4．6 mm,；氨基柱：Hypersil APS-1 250 mill× 4．6 mill，5 m,；反相柱：Zorbax ODS 150 lnln×4．6 lnln,，5， Sephadex LH-20葡聚糖凝膠,；硅膠薄層板、薄層層析顯色劑,、DMF,、甲基甘露糖、甲基葡 萄糖,、甲基半乳糖,、Sepharose；(+)-MNB甲酸及(4-)-MNB甲酸由本實(shí)驗(yàn)室方法合成,；HPLC所用試劑為國(guó)產(chǎn) HPLC級(jí),，其余試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。葡聚三糖,、葡聚六糖由,。

 

2 實(shí)驗(yàn)方法

2．1 寡糖的熒光衍生化反應(yīng) 取寡糖0．1 mg，按文獻(xiàn)[8]報(bào)道方法將其還原末端還原成糖醇,，減壓濃縮至干,。生成物溶于0．5 mL干燥的DMSO，加入0．1 mL新配制飽和NaOH水溶液,，攪拌20 rain后加入0．2 mL CH I[9】反應(yīng)2 h,，常溫減壓蒸餾除去 CH3I,，LH-20柱分離純化(柱高 15 cm，內(nèi)徑0．8 cm,，移動(dòng)相為,，甲醇，流速為0．5 mL／min),。產(chǎn)物濃縮至干,，加甲苯共沸除去水分，加入AcC1 5O0  和12 moVL的HC1 50密閉試管中50~C反應(yīng) 1 h,。反應(yīng)結(jié)束后 ,，反應(yīng)液經(jīng) N：吹干后，用 100  乙酸乙脂溶解,，平均分成兩,，管，再次用N：吹干,，分別加人含有2 mg(+)及(±)-MNB甲酸的DMF溶液5o  ,，60~C反應(yīng)0．5 h。

2．2 I-IPLC分析 將2．2．I得到的寡糖熒光衍生物用HPLC移動(dòng)相稀釋后,，用于 HPLC分析,。

2．3 寡糖 ItPLC分析標(biāo)準(zhǔn)單糖(+)-MNB甲酸衍生物的合成

 

3 結(jié)果與討論

色譜條件的選擇 為有效分離各種單糖衍生物，本研究比較了硅膠柱,、氨基柱和 ODS 3種層析柱的分離效果,。在 ODS柱上，各樣品保留時(shí)間極為接近,，分離效果不好,。硅膠柱及氨基柱基本能達(dá)到分離目的，實(shí)驗(yàn)結(jié)果 在氨基柱上5種單糖的D一,，￡一手性對(duì)映體能有效分離,，保留時(shí)間也相對(duì)較短；而在硅膠柱上,，雖 然部分單糖樣品的分離因子及分離度優(yōu)于氨基柱,，但是4-0．乙酰基．2,，3,，6．三．0．甲基葡萄糖 D．手性 異構(gòu)體的甲酸衍生物不能分開(kāi)，改變移動(dòng)相配比,，溫度條件等方法也未能達(dá)到分離目的,。因此，zui終選擇氨基柱,。