動(dòng)物性產(chǎn)品中獸藥殘留的快速檢測(cè)方法
—— ELISA & CharmⅡ
一,、前言：
1、 現(xiàn)狀
目前獸醫(yī)用藥幾乎占據(jù)了所有抗微生物藥物的50%,，因此食品病原菌,、條件致病菌和共生菌不可避免的成了耐藥菌。在過去的50年中大約有100萬噸的抗生素被釋放到生物圈中,。歐洲動(dòng)物衛(wèi)生聯(lián)盟（European Federation of Animal Health ,，F(xiàn)EDESA）對(duì)歐盟和瑞士抗生素使用統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)表明，僅1997年用于人類健康的抗生素達(dá)5460噸,，用于動(dòng)物健康的抗生素達(dá)3465噸,，用于動(dòng)物生長(zhǎng)促進(jìn)劑的抗生素達(dá)1575噸，并有逐年增加的趨勢(shì),。
在我國(guó),，由于獸醫(yī)用藥制度的不完善及一些養(yǎng)殖廠受經(jīng)濟(jì)利益的驅(qū)使及相應(yīng)的檢測(cè)監(jiān)督體系不健全，藥物的濫用現(xiàn)象更為嚴(yán)重,，動(dòng)物產(chǎn)品中獸藥的污染時(shí)有發(fā)生,。其潛在的致癌、致畸作用引起了社會(huì)的普遍關(guān)注,，由于水產(chǎn)品中氯霉素含量過高,，歐盟委員會(huì)于今年1月作出禁止中國(guó)動(dòng)物源食品進(jìn)口的協(xié)議，使得我國(guó)水產(chǎn)品對(duì)歐盟出口嚴(yán)重受挫,，雖然現(xiàn)在部分產(chǎn)品開始解禁,，但形式依然不容樂觀；美國(guó),、日本等國(guó)也開始高度關(guān)注我國(guó)水產(chǎn)品的質(zhì)量,，并出臺(tái)一系列相關(guān)政策，對(duì)我國(guó)出口動(dòng)物性產(chǎn)品進(jìn)行限制,。在現(xiàn)代文明的世界,，健康*的貿(mào)易法則將是關(guān)稅、價(jià)格,、質(zhì)量所不可比擬的,，政治上的友好往來無法替代經(jīng)濟(jì)貿(mào)易中的游戲規(guī)則。
2,、食品中獸藥殘留對(duì)人類的危害
2.1耐藥菌株的產(chǎn)生
抗生素使用和細(xì)菌耐藥性永遠(yuǎn)是互相依存、互相制約的矛盾的兩個(gè)方面,，細(xì)菌耐藥非正常增加,，往往是抗生素的非正常使用的結(jié)果,。早在1920-30年青霉素問世時(shí)，Dr Fleming就提出了青霉素的耐藥性問題,。隨著時(shí)代的發(fā)展和各種新藥的出現(xiàn),，耐藥性菌株也接踵而至（即包括藥物選擇壓力的結(jié)果也包括細(xì)菌自身的進(jìn)化）。抗生素的副作用以及耐藥菌株的存在將嚴(yán)重威脅著人類的健康,，而且臨床亞治療水平的抗生素更容易促使抗性基因的轉(zhuǎn)移,，比如對(duì)動(dòng)物進(jìn)行低水平四環(huán)素治療，其糞腸菌群由對(duì)四環(huán)素敏感逐漸變成抗四環(huán)素zui后發(fā)展成對(duì)其它藥物也產(chǎn)生抗性,。在長(zhǎng)期的生活中,，恰恰是人類和動(dòng)物腸道的正常菌群成了耐藥基因的儲(chǔ)存庫(kù)，并不斷的將耐藥基因轉(zhuǎn)移給致病菌,，并在人和動(dòng)物中交叉?zhèn)鞑?，尤其是釋放到環(huán)境中耐藥菌的危害更為嚴(yán)重，可造成耐藥基因的迅速轉(zhuǎn)移,。
2.2抗生素的毒副作用
殘留在動(dòng)物性食品中的抗生素被人們食用后,，除了加速人體內(nèi)耐藥菌株的進(jìn)化之外，抗生素本身的毒副作用往往威脅人類尤其是孕婦和嬰兒的健康,，這一點(diǎn)在過去往往很容易被忽視,。
2.2.1氯霉素
主要由Streptomyces venezuelae產(chǎn)生，目前已能人工合成,。它能抑制細(xì)菌蛋白質(zhì)生物合成,，其效應(yīng)部位位于核糖體上，因而對(duì)大多數(shù)G+菌和G－菌都有殺傷力,。氯霉素的毒副作用較多,，其常見的是再生障礙貧血、造血功能紊亂,、灰嬰綜合征,、肢體感覺和運(yùn)動(dòng)障礙及休克。雖然氯霉素在動(dòng)物疾病防治上曾發(fā)揮過一定的作用,，但由于氯霉素可以產(chǎn)生致命性的副作用,，因此歐盟已經(jīng)在畜牧、水產(chǎn)業(yè)生產(chǎn)中禁止使用,。
2.2.2b－內(nèi)酰胺
b－內(nèi)酰胺類抗生素通過抑制細(xì)菌轉(zhuǎn)肽酶的活性而干擾細(xì)胞壁肽聚糖的合成,，安芐青霉素和青霉素G是該類zui常見的兩種化合物，由Penicillium chrysogenum產(chǎn)生,。它可以通過胎盤傳給胎兒,，也能通過乳腺進(jìn)入乳中。zui常見的副作用是以皮膚出現(xiàn)紅斑為主要癥狀的過敏反應(yīng)以及胃腸道紊亂引起的腹瀉、惡心和嘔吐,。
2.2.3四環(huán)素
包括Oxytetracycline （土霉素,，OTC）、tetracycline （四環(huán)素,，TC）,、 chlortetracycline （金霉素，CTC） 和doxycycline （強(qiáng)力霉素,，DC）等,。
2.2.4 b－興奮劑
為擬交感神經(jīng)類藥物，該類興奮劑的受體為b2受體故得名,。該類興奮劑可以促使肌肉骨骼肌血管壁擴(kuò)張,、支氣管和子宮平滑肌松弛。因而在獸醫(yī)臨床上b2興奮劑被廣泛用作支氣管擴(kuò)張藥和子宮松弛藥,，同時(shí)也被非法用作動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)再分配的促生長(zhǎng)劑,。副作用，如：焦躁,、震顫,、過敏、神智不清,、食欲不振,、惡心和嘔吐等以及心悸、高血壓,、心律失常,、心動(dòng)過速等心血管癥狀，其中擬交感神經(jīng)類物質(zhì)在組織中的溢出均可導(dǎo)致組織壞死,。
2.2.5雌激素
是一種人工合成的非固醇類雌激素,，主要用于治療婦科紊亂、乳房和前列腺惡性腫瘤,，為一種致癌物質(zhì),；在肝臟中代謝緩慢，zui終能隨尿和糞便排出,。副作用包括：水腫,、引起性欲沖動(dòng)、改變?cè)陆?jīng)周期,、乳房異常發(fā)育,、肝功能改變、胃腸道紊亂,、衰竭,、頭痛,、皮膚紅斑、風(fēng)疹,。對(duì)于雄性動(dòng)物來說,，大劑量的雌激素可以增加血管栓塞的危險(xiǎn)。此外,，雌激素還能引起子宮內(nèi)膜增生，使患子宮癌的頻率增加,。大劑量使用雌激素還可以導(dǎo)致骨骼發(fā)育閉合,，停止生長(zhǎng)。也能促使生殖道變形,，對(duì)于雄性動(dòng)物能使精子變形以及嘔吐等,。
2.2.6氨基甙類抗生素
主要包括慶大霉素、鏈霉素,、新霉素,、卡那霉素等，為以氨基環(huán)醇和氨基糖相連成核糖單位的多價(jià)陽離子復(fù)合物,。氨基甙類通過與細(xì)菌核糖體不可逆結(jié)合而干擾細(xì)菌蛋白質(zhì)的合成,，進(jìn)而導(dǎo)致細(xì)胞膜塌陷。氨基甙類藥物的主要副作用是對(duì)聽覺器官和腎的毒性,、過敏反應(yīng)以及對(duì)神經(jīng)肌肉的影響,。其中，慶大霉素能引起肝功紊亂,、外周和中樞神經(jīng)炎（包括腦炎,、呆滯、抽搐）,；鏈霉素能導(dǎo)致神經(jīng)紊亂,，包括視覺神經(jīng)炎和外周神經(jīng)炎，以及嚴(yán)重的皮炎,、過敏等超敏感反應(yīng),。
二、獸藥殘留的快速檢測(cè)方法
目前上對(duì)抗生素和激素類藥物殘留的檢測(cè)主要有儀器分析法（包括HPLC和GC-MS）和生物學(xué)快速檢測(cè)法（如：ELISA,、RIA,、CharmⅡ等）。其中,，儀器分析法既要求儀器設(shè)備具有相當(dāng)高的精度,，也要求技術(shù)人員具有一定的操作和分析技能。作為儀器分析法,，其昂貴的價(jià)格和軟件更新的緩慢以及操作上的煩瑣限制了此法的推廣,；但由于檢測(cè)的靈敏度可以達(dá)到ng水平，在一些國(guó)家大型實(shí)驗(yàn)室里仍作為檢驗(yàn)的參考依據(jù)使用。而生物學(xué)快速檢測(cè)法由于其操作上的簡(jiǎn)便,、快速以及達(dá)到ng水平的靈敏度等優(yōu)點(diǎn),，以成為動(dòng)物產(chǎn)品中獸藥殘留檢測(cè)的一種重要手段。尤其是ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)）和CharmⅡ,，其操作上的簡(jiǎn)便,、快速和強(qiáng)烈的信噪比、達(dá)到ng水平的靈敏度等優(yōu)點(diǎn),，其缺陷在于該法會(huì)出現(xiàn)假陽性結(jié)果,，但做為一種快速篩選方法備受技術(shù)人員的青睞，在檢測(cè)部門有著廣泛的應(yīng)用前景,。
1,、ELISA檢測(cè)
1.1 所需儀器設(shè)備
酶標(biāo)儀：常用的有美國(guó)的bio-lab（百樂），Bio-Tex,芬蘭Labsystem等,，價(jià)格在5萬人民幣左右,；
氮?dú)獯蹈蓛x：美國(guó) Organomatic Associates，2萬左右,；
洗板機(jī)（不一定要配置）：與酶標(biāo)儀相應(yīng),，價(jià)格在3-4萬人民幣左右；
離心機(jī)：6000g/min,，國(guó)產(chǎn)價(jià)格在5000左右,；
均質(zhì)器：德國(guó)IKA，人民幣6000左右,；（拍式均質(zhì)器：1-2萬）
移液器：?jiǎn)蔚溃?550/件,，多道：5000/件；
恒溫培養(yǎng)箱：
固相萃取儀：
1.2常用ELISA試劑盒
英國(guó)朗道（RANDOX）,，德國(guó)拜發(fā)（r-Biopharm）,，德國(guó)Riedel-deHaen，荷蘭E-D,，美國(guó)NEOGEN,，意大利Tecna等。
1.3檢測(cè)原理（競(jìng)爭(zhēng)法）
1.3.1 抗原抗體的基本結(jié)構(gòu)
1.3.2檢測(cè)的基礎(chǔ)是基于抗原抗體的膠體特性與極性基的吸附作用,?？贵w的蛋白質(zhì)（免疫球蛋白），大多數(shù)抗原也是蛋白質(zhì),，在水溶液中都具膠體特性,，并帶電荷，形成相對(duì)穩(wěn)定的親水膠體,。同時(shí)抗原,、抗體含有羧基,、氨基及肽鏈等極性基團(tuán)，當(dāng)兩者由于理化特性相吻合互相吸引而結(jié)合后,，成為憎水膠體系統(tǒng),。抗原和抗體的相互吸引和結(jié)合是依靠下列各種分子間引力所促成：
庫(kù)侖吸引力/靜電引力,，抗原和抗體分子相反電荷的氨基和羧基之間相互吸引而促成,；
范德華引力，由于抗原和抗體分子的外層電子之間相互作用的擾動(dòng)產(chǎn)生一種引力,，引起分子吸引而發(fā)生結(jié)合,，這種作用取決于分子的空間構(gòu)型；
氫鍵結(jié)合作用,，具-OH、-NH2,、-COOH等親水基團(tuán)的抗體和相應(yīng)的抗原接近時(shí),，可形成相對(duì)微弱和可逆的氫鍵橋梁，使得抗原抗體結(jié)合,；
疏水作用,，抗原抗體分子側(cè)鏈上的某些氨基酸（如亮氨酸、頡氨酸及苯丙氨酸等）為疏水基團(tuán),，當(dāng)抗原抗體分子表面上的這些疏水基團(tuán)密切接觸時(shí)可排除水分子,，在兩者之間產(chǎn)生相互吸引力而發(fā)生結(jié)合。
1.3.3抗原抗體的結(jié)合具有：
特異性：取決于抗原決定簇的數(shù)量,、性質(zhì)和立體構(gòu)型,；抗體Fab段的高變區(qū)和相應(yīng)抗原決定簇的結(jié)合能力. 所以抗原抗體的種類質(zhì)量直接影響結(jié)果
可逆行: 結(jié)合僅是分子表面的結(jié)合,而非共價(jià)鍵的結(jié)合,具有相對(duì)穩(wěn)定性但為可逆反應(yīng).一定條件下（低PH、冬融,、高濃度鹽等）所以緩沖液很重要
zui適比例性：兩者量需具一定的量比關(guān)系才發(fā)生zui強(qiáng)的結(jié)合反應(yīng),。所以抗原抗體的數(shù)量也是重要因素
反應(yīng)具階段性：受環(huán)境中電解質(zhì)、溫度,、PH,、等因素的影響。所以在ELISA實(shí)驗(yàn)時(shí)各種步驟一定要準(zhǔn)確到位,。
1.3.4以氯霉素為例：
酶標(biāo)板包被針對(duì)兔IgG（氯霉素抗體）的羊抗體,。加入氯霉素抗體，氯霉素酶標(biāo)記物,，氯霉素標(biāo)準(zhǔn)液或樣品溶液,。游離氯霉素與氯霉素酶標(biāo)記物競(jìng)爭(zhēng)氯霉素抗體結(jié)合位點(diǎn)，同時(shí)氯霉素抗體也與固定的羊抗體結(jié)合,。沒有結(jié)合的氯霉素酶標(biāo)記物在洗滌步驟中被除去,。將酶基質(zhì)和發(fā)色劑加到板孔中并孵育,。結(jié)合的氯霉素酶標(biāo)記物將無色的發(fā)色劑轉(zhuǎn)化為藍(lán)色產(chǎn)物。加終止液后使顏色由藍(lán)變黃,。用450nm判讀,，吸光度值與樣品中氯霉素含量成反比。 大多數(shù)試劑盒包被的是二抗,。
RONDOX的試劑盒是直接將氯霉素特異性抗體預(yù)包被酶標(biāo)板上,，當(dāng)在酶標(biāo)孔中加入樣品和酶標(biāo)記氯霉素后，樣品中的氯霉素和酶標(biāo)記氯霉素競(jìng)爭(zhēng)抗體結(jié)合位點(diǎn),，洗滌后底物顯色,，加酸終止之后，顏色由藍(lán)變黃,。用450nm判讀,，顏色深度與樣品中氯霉素含量成反比。
不同的ELISA原理直接影響其檢測(cè)下限,、特異性及結(jié)果的計(jì)算,。
1.4 樣品的前處理
不同樣品有其特定的前處理方法，主要有以下幾種：
1.4.1有機(jī)物抽提法：（氯霉素）
利用藥物在有機(jī)物中的溶解性,，達(dá)到分離純化的目的
樣品均質(zhì) 稱量 乙晴和或乙酸乙酯抽提 離心 吹干
異辛烷/氯仿或正己烷抽提 離心 取水相分析
1.4.2離子交換法（如：C18過柱法）（鏈霉素）
離子交換是利用一些帶離子基團(tuán)的物質(zhì),，吸附交換帶相反電荷的蛋白質(zhì)，將蛋白質(zhì)按所帶電荷不同或量的差異分成不同的組分,。
樣品稱量 溶解 上柱
C18柱平衡 洗柱 吸柱干燥 洗提 吹干
緩沖液重懸 分析
1.4.3（免疫）親和層析（雌激素）
利用生物大分子的生物學(xué)特性而設(shè)計(jì)的層析分離技術(shù),，如利用抗原和抗體、酶和酶的抑制物或配體,、激素和受體等之間的親和力,，在一定條件下，兩者可緊密結(jié)合形成復(fù)合物,，若將其中一者固定在載體上,，則可從溶液中提取和分離相應(yīng)的另一方，并達(dá)到很高的純度?，F(xiàn)有商品化生產(chǎn),，（方便，減少裝柱等繁瑣步驟）其操作步驟與上者相似,，可以按照試劑盒提供的步驟進(jìn)行,。
1.5酶標(biāo)免疫分析程序（室溫20-240C條件下操作）
每一個(gè)盒中的試劑足夠進(jìn)行96個(gè)測(cè)量（包括標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定孔），以E-D CAP檢測(cè)試劑盒為例：
1）取出試劑盒恢復(fù)至室溫,，充分混均,；
2）釋緩沖液（以ddw）稀釋備用（也可用磷酸鹽緩沖液，但要）,；
3）洗緩沖液（以ddw）稀釋備用,，也可用PBST（磷酸鹽土溫—20緩沖液）,；
4）酶標(biāo)記物的配制：按試劑盒說明配置、混均,，2-8度陰暗處保存；
5）抗體的配制：按試劑盒說明配置,、混均,，2-8度陰暗處保存；
6）取足夠的微空條,，記錄加樣順序,；
7）a．吸取100微升稀釋緩沖液A1、A2（試劑空白）,，
b．吸取50微升稀釋緩沖液到B1,、B2（零標(biāo)準(zhǔn)），
c．吸取50微升標(biāo)準(zhǔn)液到C—H孔,，
d．加50微升樣品到其余孔,；
8）加酶標(biāo)記物和抗體到除A1、A2的所有孔,；
10）蓋膜，震蕩1分鐘,；
11）在一定條件下孵育,；
12）洗板，一定要*充分,，并且次數(shù)固定,，推薦用洗板機(jī)（百樂）；
13）加底物,，室溫培養(yǎng)（25度）孵育,；
14）加終止液；
15）450nm波長(zhǎng)下讀數(shù),。
1.6標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
a．每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)液或樣品的OD值均要減去空白A1,、A2的OD值，
b．標(biāo)準(zhǔn)液和樣品的OD值除以零標(biāo)準(zhǔn)（B1,、B2）的OD值
c． 繪制半對(duì)數(shù)曲線（以B/B0為Y軸,，標(biāo)準(zhǔn)樣品濃度的對(duì)數(shù)為X軸），可用一些專業(yè)軟件,，也可用半對(duì)數(shù)紙或在EXCEL上繪制,。
2、CharmⅡ檢測(cè)
CHARM II 6600/7600分析儀是一臺(tái)多功能,、單樣品的液體閃爍（LSC）和生物發(fā)光計(jì)數(shù)器,。該法具有快速,、簡(jiǎn)便的特點(diǎn)，但其假陽性率教高,，適宜快速篩選
2.1儀器組成：
Charm II 6600 / 7600分析儀
Charm孵育器
CentraCL2離心機(jī)
均質(zhì)器,、移液器
2.2 檢測(cè)原理
微生物受體免疫分析法，屬于免疫分析法的一種,，其建立的基礎(chǔ)是藥物功能團(tuán)與微生物受體位點(diǎn)的結(jié)合反應(yīng),。在某些方面類似于放射免疫分析（RIA），所不同的是RIA使用抗體作為結(jié)合劑,，而受體分析則是使用細(xì)菌細(xì)胞的固定位點(diǎn)當(dāng)做特殊的結(jié)合劑,。
一個(gè)單一的細(xì)菌細(xì)胞含有可結(jié)合藥物的特殊結(jié)合位點(diǎn)，藥物和受體位點(diǎn)的結(jié)合反應(yīng)離解常數(shù)低,，因而具特異性和靈敏性,。對(duì)于該法具體原理Charm公司未有詳細(xì)深入的報(bào)道（商業(yè)方面考慮），主要是利用兩種不同的細(xì)菌提供7大類抗生素結(jié)合的必須位點(diǎn),，藥物的功能團(tuán)與位點(diǎn)有關(guān),，不象免疫分析只涉及到側(cè)鏈，一種微生物受體可結(jié)合一類藥物的所有藥物,。
象ELISA類似,，這種結(jié)合也是一種競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合。在試管中加入一定量的細(xì)菌（受體）,、放射性標(biāo)記藥物和樣品,，樣品中的藥物和放射性標(biāo)記藥物競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合受體，未于受體位點(diǎn)結(jié)合的標(biāo)記性藥物在讀數(shù)前被去掉,，加入閃爍液,，在分析儀上讀數(shù)。
2.3檢測(cè)的一般程序
2.3.1準(zhǔn)備工作：首先按說明書配制好所需的提取緩沖液,、M2緩沖液,、陰性對(duì)照和陽性對(duì)照。
儀器零點(diǎn)測(cè)定：用空試管測(cè)定儀器的零點(diǎn)是否正常,。
試劑和儀器有效性確認(rèn)：檢測(cè)陰性對(duì)照液和陽性對(duì)照液各3次,，求出cpm值的平均值，與出廠的計(jì)數(shù)單對(duì)比,，能在其±10%左右波動(dòng),。如果與計(jì)數(shù)單相比偏移較大，試劑可能部分失效,，但只要陽性平均值/陰性平均值小于0.7,，試劑仍然可用，但靈敏度會(huì)有所降低,。
控制點(diǎn)的確定：控制點(diǎn)是陰性結(jié)果與陽性結(jié)果的臨界值,。利用控制點(diǎn)來判斷結(jié)果,。有兩種確定控制點(diǎn)的方法：根據(jù)樣品的種類或檢測(cè)水平選擇適當(dāng)?shù)目刂泣c(diǎn)確定方法?？刂泣c(diǎn)確定方法有二,。有些說明書上兩種方法都列出，用戶可根據(jù)需要選擇,，選第二種,。
方法一：直接以陰性對(duì)照來確定控制點(diǎn)，一般樣品干擾小或接近儀器的下*,，采用這種方法,，只需再做3次，與前3次試劑性能確認(rèn)的結(jié)果一起求平均值,，然后減法X%,，即為控制點(diǎn)。X為變數(shù),，由廠家用定量方法校準(zhǔn),。
方法二：以空白加標(biāo)樣品來確定控制點(diǎn)。這種方法的關(guān)鍵是找到陰性樣品,，如果沒有其它的定量方法找陰性樣品,，可根據(jù)陰性對(duì)照平均值來找陰性樣品（陰性對(duì)照平均值±X%）。用此陰性樣品,，按檢測(cè)水平和稀釋倍數(shù),，加抗生素標(biāo)準(zhǔn)品，用此空白加標(biāo)樣品,，測(cè)定6次CPM值，求平均值,，控制點(diǎn)＝平均值＊（1＋20%）,。
2.3.2測(cè)定實(shí)際樣品
前處理：不同的樣品具不同的前處理方法，一般尿樣,、血清,、血漿等只需用緩沖液稀釋即可，而組織樣品則需均質(zhì),、提取,、孵育等過程，對(duì)于蜂蜜等一些樣品則要過柱,?？偟膩碚f，前處理要比ELISA更簡(jiǎn)便,、快速,。
按照操作說明檢測(cè)結(jié)合試劑片加入試管,；加入300微升水混均；加入處理過的樣品,；加入標(biāo)記性藥物,，混合；孵育,；離心,，棄去上清液；加水混均,；加閃爍液,，混均；讀數(shù),。
三,、實(shí)驗(yàn)室分析質(zhì)量控制
涉及儀器的校正、過程控制,、標(biāo)準(zhǔn)物控制,、環(huán)境、實(shí)驗(yàn)室管理（監(jiān)控所進(jìn)行的測(cè)試及記錄結(jié)果,，以便發(fā)現(xiàn)發(fā)展趨勢(shì),，統(tǒng)計(jì)技術(shù)進(jìn)行結(jié)果評(píng)審）
1、快速篩選方法及定性方法
選擇性：檢出目的物質(zhì)的能力,；
靈敏性：樣品中檢出這種藥物真正陽性結(jié)果的比率,；
準(zhǔn)確性：所得值和真實(shí)值的一致性，用不確定度來衡量——重復(fù)多次測(cè)定值和真實(shí)值之差,；
檢測(cè)限：分析方法能從樣品背景信號(hào)中檢測(cè)出待檢物質(zhì)的zui低濃度,；
重復(fù)性：
2、定量方法的附加要求
回收率：
定量限：分析方法能對(duì)樣品中待檢物質(zhì)進(jìn)行定量檢測(cè)的zui低濃度,，反映該方法在低濃度端分析結(jié)果的可靠性,；
精密度：對(duì)同一樣品重復(fù)測(cè)定，每次測(cè)定值和均值的接近程度,，主要反映隨機(jī)誤差,；
重復(fù)性：批內(nèi)重復(fù)、批間重復(fù)線形范圍：曲線的擬和
