實驗室離心機離心方法介紹
實驗室離心機離心方法介紹
實驗室離心機分離方法不一,適用場合也不盡相同,。目前zui主流的離心分離方法主要是差速離心法和區(qū)帶離心法,其實在實驗室離心技術(shù)制備超離心法一文中有提及兩種離心方法,,今天筆者對這兩種方法的原理及應(yīng)用介紹進行補充和完善,。
1. 差速離心法:許多具有生物活性的生物大分子和亞細胞器是不穩(wěn)定的,需要低溫高速離心,,zui常用的是差速離心法,。通過離心后倒出上清液和沉淀分開,把分離出來的上清液再增大轉(zhuǎn)速離心,,分離出第二部分沉淀,,這樣不斷增大轉(zhuǎn)速,逐級分離出所需要的物質(zhì),。利用這種方法可以有效地分離大小上差別較大的顆粒,,但不能分離大小相似的顆粒,而且所分離出來的組分往往是不均一的,,雜有其他種類的顆粒,。
2.區(qū)帶離心法:其中又可以分為兩種:速率區(qū)帶離心和等密度速率區(qū)帶離心。
1) 速率區(qū)帶離心法:這是將小量懸液放在一平緩的密度梯度液上,,用此梯度液來穩(wěn)定顆粒的沉降,。由于離心,顆粒離開起始區(qū)帶而移動,,移動的速度是由顆粒的大小,、形狀和它們所受實驗室離心機的離心力來決定的。離心一段時間歷,,各種穎粒將按照它們的相對速度移動而各個分開,,成為一系列區(qū)帶。用這種方法我們可以將沉降速度差為20%或者更大的顆粒,。
2)等密度區(qū)帶離心法:這是將要分離的顆粒懸液放至密度梯度液上,,或者實際上將顆粒溶于制作梯度的溶液中。通過離心,,顆?;蛘呱细』蛘呦鲁粒_到與它們自己密度相同的液體處在這里它們沒有重量,,不管離心多長時間,,它們再也不移動了。這些顆??沙蔀橐幌盗袇^(qū)帶,,每種顆粒在它自己的密度區(qū),。所以,這是一種利用顆粒浮密度的大小分離顆粒大小的方法,。使用的介質(zhì)通常是氯化銫(Cscl)和硫酸銫(Cs2SO4),。前者適合于DNA分離,后者適合于RNA分離,。這種方法與速率區(qū)帶離心法相比,,它有一個主要的缺點是在離心期間,顆粒不可避免地暴露在高濃度的梯度溶液中,,會引起顆粒的部分損傷,,并可能出現(xiàn)相當于損傷顆粒的一些額外的區(qū)帶
。