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定氮儀等三款儀器對于蛋白質(zhì)測定分析
食品中蛋白質(zhì)含量測定方法多有報導,,如凱氏定氮儀法,、酚試劑法、雙縮尿法、光度法,、甲醛滴定法和電流法等,,但都存在著操作繁瑣、費時等不足,,而且文獻報道基本是采用進口儀器,,不適合一般實驗室使用。經(jīng)典的凱氏定氮儀法是在食品分析,、營養(yǎng)和生化研究中廣泛應用的方法,,但操作也較為繁瑣,耗時較長,,作為本科學生實驗無法在規(guī)定的時間內(nèi)完成整個測定過程,;同時大量試劑消耗造成資源浪費。
本文利用控溫消解爐同時可以消解多個樣品,,利用定氮儀自動完成加堿,、定量蒸餾吸收。自動電位滴定儀具有準確度高和自動化程度高的特點,。本文測定糧食中蛋白質(zhì)的含量,,對消解條件進行了摸索,并與國標法進行了比對,。試劑:K2S04,;CuS04•5H2O;H2S04,;H3B03,;NaOH(試劑均為分析純)。精稱0.1~0.5g糧食樣品于干燥的消解管中,,加入0.3gCuS04•5H20,、1.0gK2S04和5mLHzS04搖勻,加熱,,消解,;待反應液呈藍綠色澄清透明后,繼續(xù)加熱10min后取下冷卻至室溫,。將上述消解管直接卡于凱氏定氮儀,,將裝有20mL硼酸溶液的錐形瓶置于凱氏定氮儀吸收架,加堿至液體呈棕褐色,,蒸餾至凱氏定氮儀發(fā)出信號后,取下錐形瓶,,并置于全自動電位滴定儀,,用硫酸標準溶液滴定,按上述方法考察試劑空白。按照GB/T5009.5-2003方法進行測定Ⅲ,。
實驗考察了樣品量與消化劑用量對測定結(jié)果的影響,,當樣品量為0.1~0.5g時;CuSO4,、K2SO4和H2SO4試劑用量分別為0.39,、1.0g和5mL時消解效果zui為理想,消解速度快,,吸收及電位滴定效果較好,,其測定值符合要求。當樣品量過大時,,則消解,、吸收、滴定效果均不理想,。設置不同的消解時間,,測定樣品的蛋白質(zhì)含量。加熱10min的測定值與國標法測定值接近,。取蛋白質(zhì)含量不同的4種樣品,,分別加標(硫酸銨)回收率實驗,硫酸氨的回收率均在99.0%以上,。采用本法與國標定氮法分別測定4種樣品蛋白質(zhì)含量,。結(jié)果表明,兩種方法無顯著性差異(P=0.95)時,,量值<2.30,,符合要求。取蛋白質(zhì)含量不同的4種樣品,,平行測定5次,,相對平均偏差(RSD)均小于1.0%,表明該法的精密度良好,。
本方法利用三種儀器測量食品中蛋白質(zhì)的含量,,具有較高的準確度和精密度,操作簡便,、快速,、省時、省力,,設備價格低,,易于推廣,且試劑用量少,,降低實驗成本,,同時也減少了對環(huán)境的污染,這不僅能使本科學生在規(guī)定時間內(nèi)完成整個實驗過程,還可以讓學生在一般基礎實驗室學到,、用到較先進的儀器,。