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蛋白質(zhì)含量測定方法
蛋白質(zhì)含量測定方法一般來說,，有以下五種：凱氏定氮法,，雙縮尿法（Biuret法）、Folin－酚試劑法（Lowry法）,、紫外吸收法和考馬斯亮藍法（Bradford法）,。
表五種蛋白質(zhì)含量測定方法的比較
| 方法 | 靈敏度 | 時間 | 原理 | 干擾物質(zhì) | 說明 |
| 凱氏定氮法 （Kjedahl法） | 靈敏度低，適用于0.2~ 1.0mg氮,，誤差為 ±2％ | 費時 8～10小時 | 將蛋白氮轉(zhuǎn)化為氨,，用酸吸收后滴定 | 非蛋白氮（可用三氯乙酸沉淀蛋白質(zhì)而分離） | 用于標準蛋白質(zhì)含量的準確測定；干擾少,；費時太長 |
| 雙縮脲法（Biuret法） | 靈敏度低 1～20mg | 中速 20~30分鐘 | 多肽鍵＋堿性Cu2＋®紫色絡(luò)合物 | 硫酸銨,； Tris緩沖液； 某些氨基酸 | 用于快速測定,，但不太靈敏,；不同蛋白質(zhì)顯色相似 |
| 紫外吸收法 | 較為靈敏 50～100mg | 快速 5～10分鐘 | 蛋白質(zhì)中的酪氨酸和色氨酸殘基在280nm處的光吸收 | 各種嘌吟和嘧啶； 各種核苷酸 | 用于層析柱流出液的檢測,；核酸的吸收可以校正 |
| Folin－酚試劑法（Lowry法） | 靈敏度高 ～5mg | 慢速 40～60 分鐘 | 雙縮脲反應(yīng),；磷鉬酸－磷鎢酸試劑被Tyr和Phe還原 | 硫酸銨； Tris緩沖液,； 甘氨酸,； 各種硫醇 | 耗費時間長；操作要嚴格計時,； 顏色深淺隨不同蛋白質(zhì)變化 |
| 考馬斯亮藍法（Bradford法） | 靈敏度zui高 1～5mg | 快速 5～15分鐘 | 考馬斯亮藍染料與蛋白質(zhì)結(jié)合時,，其lmax由465nm變?yōu)?95nm | 強堿性緩沖液； TritonX-100; SDS | 的方法,； 干擾物質(zhì)少,； 顏色穩(wěn)定； 顏色深淺隨不同蛋白質(zhì)變化 |
從以上表格中可以得出,，不同的方法有不同的特點和優(yōu)勢,，如紫外吸收法測定時間快。但是綜合起來,，zui后一種考馬斯亮藍法（Bradford法）效率zui高,，無論是測定時間，靈敏度還是受干擾程度,，都是比較占優(yōu)勢的,。
下面，我們來重點介紹一下其中一種蛋白質(zhì)含量測定方法--凱氏定氮法。
凱氏定氮法（Kjedahl法）
首先將濃硫酸倒入樣品中,，邊倒邊搖晃,，以使?jié)饬蛩崤c樣品充分接觸，然后加熱試劑,。如果你需要加快實驗進度,，可以加入CuSO4作催化劑，這樣,，實驗的反應(yīng)時間就會大大縮短,。CH2COOH和H2SO4反應(yīng)生成氨氣，然后氨氣又與H2SO4發(fā)生作用,，固定了氮元素,。這時我們得到了（NH4）2SO4的溶液，然后我們可以用NaOH去跟硫酸銨反應(yīng),，通過計算NaOH的使用量,，就可以計算出氮的含量。下面是整個定氮法中發(fā)生的化學(xué)反應(yīng),。
CH2COOH+ 3H2SO4 = 2CO2 + 3SO2 +4H2O +NH3 （1）
2NH3 + H2SO4= （NH4）2SO4 （2）
（NH4）2SO4 + 2NaOH =2H2O +Na2SO4 + 2NH3 （3）
當(dāng)我們得到氮的含量以后,，我們就可以通過一定的計算，zui終算出蛋白質(zhì)的含量,。
凱氏定氮法常用于有機化合物中的氮含量的測定,，是蛋白質(zhì)含量測定的經(jīng)典方法，雖然在測試過程中,，試劑用量很大,，但是，不可否認,，它所適用的樣品范圍之廣,，測試結(jié)果之，都是*的,。
現(xiàn)在,，隨著科技的發(fā)展，我們已經(jīng)研究出帶消化爐的凱氏定氮儀,，它把定氮過程中的前兩步驟通過儀器完成,，方便了整個過程的實施。凱氏定氮儀能夠自動的對樣品進行消化,，然后蒸餾,，智能化完成，節(jié)省了時間和精力,，提高了工作效率,。這種具有有準確、快速、簡便,、低耗,、穩(wěn)定的優(yōu)點。浙江托普儀器有限公司提供這種產(chǎn)品,，24小時：,。
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