氨基色譜柱，全稱(chēng)氨丙基鍵合硅膠色譜柱,，在HPLC中既可以作為反相色譜柱,，又可以作為正相色譜柱.使用者在進(jìn)行正反相轉(zhuǎn)換操作過(guò)程中一定要注意以下幾項(xiàng)：
對(duì)于新購(gòu)買(mǎi)到的柱子，首先請(qǐng)注意打開(kāi)分析測(cè)試說(shuō)明書(shū),，了解柱子的保存溶劑,。如果保存溶劑與你將要使用的流動(dòng)相極性不同不會(huì)互溶，請(qǐng)先用異丙醇過(guò)渡,。過(guò)渡過(guò)程中注意因異丙醇粘度較大,，會(huì)導(dǎo)致柱壓很高，適當(dāng)調(diào)低流速即可,。如果要使用的流動(dòng)相中還含有緩沖鹽類(lèi),，建議在用分析流動(dòng)相之前，先用不含緩沖鹽的同比例流動(dòng)相過(guò)渡,，這樣可避免緩沖鹽在分析柱內(nèi)的析出,。
柱效檢測(cè)：
我用于判斷一個(gè)用戶(hù)是否有經(jīng)驗(yàn)的指標(biāo)之一，是用戶(hù)是否習(xí)慣配制一些柱效檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)溶液,。說(shuō)到柱效檢測(cè),，我可以向大家提供一個(gè)方法，而且很通用,，你也可以用同樣的標(biāo)準(zhǔn)溶液和流動(dòng)相來(lái)檢測(cè)硅膠柱和氰基柱,。
流動(dòng)相：
10％乙酸乙酯＋90％正己烷 流速1.0
標(biāo)準(zhǔn)溶液：
乙苯（如乙苯找不動(dòng)就用甲苯代替唄）＋苯甲酸甲酯
檢測(cè)波長(zhǎng)254nm
這個(gè)方法特別適用于新購(gòu)柱子（新購(gòu)柱子往往保存在正相溶劑中）時(shí)即進(jìn)行檢測(cè)，如有問(wèn)題，可及時(shí)與供應(yīng)商溝通,。也適合在柱子在準(zhǔn)備放置相當(dāng)長(zhǎng)一段時(shí)間之前進(jìn)行充分清洗后進(jìn)行檢測(cè)作為記錄留檔,。在平常的使用過(guò)程中，如果分析物是固定重復(fù)的,，我們當(dāng)然可以從對(duì)分析物的分離分析情況來(lái)作出判斷,；但如果分析物和分析條件不同時(shí)，定期檢測(cè)柱效可以避免柱效下降導(dǎo)致分離不佳再分析查找原因這樣浪費(fèi)人力物力的過(guò)程,。不過(guò)特別要注意的是,，當(dāng)氨基柱（或氰基柱）在反相條件中使用時(shí)，如用該條件檢測(cè),，請(qǐng)注意流動(dòng)相的換相過(guò)渡問(wèn)題,。
氨基柱的使用：
需要注意的是，氨基柱的鍵合官能團(tuán)氨丙基要比C18,C8柱的鍵合官能團(tuán)C18,C8要容易水解,，所以首先要做好其使用壽命稍遜的心理準(zhǔn)備,，特別是當(dāng)你的使用條件是反相條件下時(shí)。
反相條件下使用時(shí),，要特別注意控制PH值范圍,，PH值越低越有發(fā)生水解的危險(xiǎn)，流動(dòng)相中水的比例越高當(dāng)然也越有發(fā)生水解的危險(xiǎn),。所以,，在使用后以及準(zhǔn)備長(zhǎng)時(shí)間放置該柱時(shí)，必要的清洗和將氨基柱保存于純的有機(jī)溶劑中是很好的保養(yǎng)措施,。
有一種情況是,，當(dāng)使用氨基柱進(jìn)行酸性物質(zhì)如果汁的分析時(shí)（分析其中的糖份），酸性物質(zhì)的存在意味著質(zhì)子的存在,，可能會(huì)使略帶負(fù)電荷的氨基官能團(tuán)質(zhì)子化,，導(dǎo)致使用一段時(shí)間后對(duì)于某些類(lèi)的分析物保留性質(zhì)有所改變或表現(xiàn)在柱效下降。這時(shí),，Kromasil專(zhuān)家所給的建議是：用5-10倍的柱體積的含0.5- 1.0％NH3的50-50乙腈-水溶液沖洗該柱（沖洗后當(dāng)然要再用不含堿的流動(dòng)相洗去多余氨）,，之后再進(jìn)行分析這類(lèi)酸性分析物時(shí)建議在流動(dòng)相中略微添加少許氨如0.1％。
氨基柱的清洗
簡(jiǎn)單說(shuō)起來(lái),，正相條件下使用的氨基柱你就參照硅膠柱的清洗方法,；反相條件下使用的氨基柱你就參照C18的清洗方法。
平時(shí)在正相條件下使用：
首先用50倍柱體積的異丙醇清洗,，因異丙醇粘度較大可適當(dāng)放低流速,；之后，用50倍的甲醇清洗,；之后,，用異丙醇過(guò)渡回到平常使用的正相流動(dòng)相，即可。
平時(shí)在反相條件下使用：
緩沖鹽應(yīng)及時(shí)沖洗,，以及不能直接用純甲醇沖洗緩沖鹽等,，屬常識(shí)就不作特別交待了。
用50倍純甲醇沖洗,；之后,，用異丙醇過(guò)渡后，用二氯甲烷沖洗色譜柱,；之后,，再用異丙醇過(guò)渡回來(lái)到甲醇條件下。
這些清洗方法,，主要是針對(duì)當(dāng)樣品中有雜質(zhì)逐步吸附累積到填料上時(shí)的處理方法,，色譜柱表現(xiàn)行為為諸如柱壓增高柱效降低等
LUNA氨基柱的使用方法
1.氨基柱既可以正相使用，也可以反相使用,，但是要注意到的是：正相溶劑和反相溶劑往往是不互溶的,，正常情況新氨基柱保存在正相環(huán)境中，例如LUNA
氨基柱保存在正己烷-乙腈（99：1）中,。
2. 正相使用
2.1
新柱子可直接用流動(dòng)相,。推薦先用正己烷-乙腈（99：1）以0.5ml/min的流速?zèng)_10倍柱體積，再根據(jù)流動(dòng)相選用極性相近的氯仿或二氯甲烷以相同的流速?zèng)_10倍柱體積,，zui后換成流動(dòng)相,。
2.2
正相使用時(shí),，不宜分析含醛基,、羰基的化合物，不可用于還原糖的分析,；流動(dòng)相要*脫氣,，并不得含有羰基化合物和過(guò)氧化物2.3 任何時(shí)候更換流動(dòng)相時(shí)都要確保新流動(dòng)相與柱子原保存液可互溶。
3 反相使用
3.1
先用正己烷-乙腈（99：1）以0.5ml/min的流速?zèng)_10倍柱體積,，再依次以相同的流速相同的用量用氯仿,、異丙醇、甲醇,、甲醇-水（50：50）沖柱子,。
3.2
以0.5ml/min的流速用30倍柱體積的pH11.0的氫氧化鈉（LUNA）水溶液沖柱子（注意pH值切不可超過(guò)11.0），立即用水（
0.5ml/min的流速,，30倍柱體積）沖洗,，再換成流動(dòng)相。
3.3
配制流動(dòng)相時(shí),，應(yīng)各組分分別量取,，比例較小的組分要精密量取，需調(diào)pH值時(shí)要精密到0.1。
3.4
反相條件下使用時(shí),，要特別注意控制pH值范圍,，pH值越低越有發(fā)生水解的危險(xiǎn)，流動(dòng)相中水的比例越高當(dāng)然也越有發(fā)生水解的危險(xiǎn),。的pH范圍在pH
3.0-7.0
3.5
如果要使用的流動(dòng)相中還含有緩沖鹽類(lèi),，建議在用分析流動(dòng)相之前，先用不含緩沖鹽的同比例流動(dòng)相過(guò)渡,，這樣可避免緩沖鹽在分析柱內(nèi)的析出,。
3.6
有一種情況是，當(dāng)使用氨基柱進(jìn)行酸性物質(zhì)的分析時(shí),，酸性物質(zhì)的存在意味著質(zhì)子的存在,，可能會(huì)使略帶負(fù)電荷的氨基官能團(tuán)質(zhì)子化，導(dǎo)致使用一段時(shí)間后對(duì)于某些類(lèi)的分析物保留性質(zhì)有所改變或表現(xiàn)在柱效下降,。建議：用5-10倍的柱體積的含0.5-1.0％NH3的乙腈-水（50:50）溶液沖洗該柱（沖洗后當(dāng)然要再用不含堿的流動(dòng)相洗去多余氨）,，之后再進(jìn)行分析這類(lèi)酸性分析物時(shí)建議在流動(dòng)相中略微添加少許氨如0.1％。
4
色譜柱的沖洗：簡(jiǎn)單說(shuō)起來(lái),，正相條件下使用的氨基柱就參照硅膠柱的清洗方法,；反相條件下使用的氨基柱就參照C18的清洗方法。
5 色譜柱的保存
5.1
正相使用時(shí),，將柱子沖洗干凈后,，用正己烷-乙腈（99：1）保存。
5.2
反相使用時(shí),，如短期不用,，可用甲醇或乙腈保存；長(zhǎng)期不用時(shí)需將甲醇依次用異丙醇,、氯仿
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