在選用色譜柱時,,應充分考慮所分析樣品的極性大小、化合物的種類數量,、結構特征,。根據化合物的性質,選擇合適的色譜柱和分析條件,。不同類型的色譜柱使用的流動相不同,,使用錯誤的流動相會降低柱效,損傷柱子,。如分析極性較大的多糖類成分,,應當采用親水性的反相填料。對于**使用的色譜柱,,還應按照廠家的出廠說明對色譜柱進行低流速的沖洗活化,,活化后的色譜填料共價鍵鍵合力增強,柱效提高,,壽命延長,。
樣品的準備與預處理
我們的經驗是樣品純化得越干凈,色譜柱的使用壽命越長,。許多樣品,,尤其是生物樣品,組份非常復雜,,對色譜柱的損傷性較大,,不經預處理的樣品直接分析,會嚴重縮短色譜柱的使用壽命,。因此,,在樣品的準備時需對樣品進行預處理,包括準備溶劑的選擇,、樣品過濾等,。
制樣溶劑的選擇
制樣溶劑通常需要考慮樣品的溶解性,、與流動相的相溶性、色譜填料的適用性等方面,。這類溶劑需對樣品有較大的溶解性,,而且與流動相溶,洗脫強度*好低于流動相或梯度洗脫中的起始流動相,,以免影響樣品分離,。目前許多手性色譜柱都禁止使用DMSO、四氫呋喃,、氯仿等溶解樣品,,這些溶劑會破壞固定相的結構,從而縮短色譜柱的使用壽命,。此外,,制樣溶劑還應與色譜系統其他部件如高壓泵、進樣器等相適用,。
色譜柱按用途可分為分析型和制備型兩類
①常規(guī)分析柱(常量柱),,內徑2~5mm,柱長10~30cm;
②窄徑柱(narrowbore),,內徑1~2mm,,柱長10~20cm;
③毛細管柱(又稱微柱microcolumn),,內徑0.2~0.5mm,;
④半制備柱,內徑>5mm,;
⑤實驗室制備柱,,內徑20~40mm,柱長10~30cm,;
⑥生產制備柱內徑可達幾十厘米,。
色譜柱的性能除了與固定相性能有關外,還與填充技術有關,。在正常條件下,,填料粒度>20um時,干法填充制備柱較為合適,;顆粒<20um時,,濕法填充較為理想。填充方法一般有四種:
①高壓勻漿法,,多有用于分析柱和小規(guī)模制備柱的填充,;
③軸向加壓法,主要用于裝填大直徑柱,;
④干法,,柱填充的技術性強,,大多數實驗室使用己填充好的商品柱。
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