陰離子交換色譜柱純化步驟使用能力
陰離子交換色譜柱介質(zhì)的選擇
離子交換介質(zhì)首先要考慮目的分子的大小,，因?yàn)槟康姆肿訒?huì)影響其接近介質(zhì)上的帶電功能集團(tuán),，因此也會(huì)影響介質(zhì)對(duì)目的分子的動(dòng)力載量，從而影響其分離,。
對(duì)于大多數(shù)純化步驟來(lái)說(shuō),，建議從開(kāi)始的階段使用強(qiáng)離子交換柱，可在摸索方法的過(guò)程中有一個(gè)寬的pH范圍,。對(duì)于已知等電點(diǎn)的蛋白質(zhì),，可根據(jù)其等電點(diǎn)來(lái)選擇。而未知等電點(diǎn)的蛋白質(zhì),，在實(shí)際操作中常采用這樣的方法,，先選擇一個(gè)陰離子交換劑，再選擇一個(gè)中性的pH緩沖液,，將蛋白質(zhì)樣品透析至pH7.0,，然后過(guò)陰離子交換柱。根據(jù)過(guò)柱后的結(jié)果確定下一個(gè)使用的緩沖液pH,。
陰離子交換色譜柱流動(dòng)相的選擇
離子交換色譜的流動(dòng)相必需是有一定離子強(qiáng)度的并對(duì)pH有一定緩沖能力的溶液,。為了避免目的蛋白失活,，使用緩沖液可穩(wěn)定流動(dòng)相的pH，使之在色譜過(guò)程中不發(fā)生明顯變化,，同時(shí)可穩(wěn)定目的分子上的電荷量,，保證色譜結(jié)果的重要性。
選擇緩沖液一般按照以下原則：陽(yáng)離子交換劑應(yīng)選用陰離子緩沖液,，可用檸檬酸鹽,、磷酸鹽、醋酸鹽,、甘氨酸鹽等；陰離子交換劑應(yīng)選用陽(yáng)離子緩沖液,，可用烷基胺,、Tris、氨基乙醇胺,、乙二胺,、咪唑等；起始緩沖液的濃度應(yīng)盡可能低（<100mmol/L）這樣可以使色譜柱上更多的吸附分離物質(zhì),；緩沖液應(yīng)不含會(huì)影響被分離物質(zhì)活性和溶解度成分,，洗脫時(shí)盡量不采用pH梯度洗脫。
陰離子交換色譜柱的選擇
離子交換色譜通常選用粗短柱,，即高徑比小的色譜柱,。典型的離子交換柱高度在5~20cm，高徑比一般小于5,。如果需要增加離子交換劑的體積,，只能從增加柱的直徑而不能增加其高度。如果是連續(xù)梯度洗脫,，可以適當(dāng)增加柱的長(zhǎng)度,。
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