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液相色譜儀工作原理
閱讀：1528 發(fā)布時間：2010-5-13
一,、簡介
英文：
Iquid Chromatography
利用混合物在液-固或不互溶的兩種液體之間分配比的差異,，對混合物進(jìn)行先分離,，而后分析鑒定的儀器,。
液相色譜儀根據(jù)固定相是液體或是固體,，又分為液-液色譜（LLC）及液-固色譜（LSC）?，F(xiàn)代液相色譜儀由高壓輸液泵,、進(jìn)樣系統(tǒng)、溫度控制系統(tǒng),、色譜柱,、檢測器、信號記錄系統(tǒng)等部分組成,。與經(jīng)典液相柱色譜裝置比較,，具有、快速,、靈敏等特點,。
對高沸點、難氣化合物的混合物通過色譜柱核淋洗劑并以實現(xiàn)分離,。應(yīng)用于生物化學(xué),、生物醫(yī)學(xué)、環(huán)境化學(xué),、石油化工等部門,。
二、工作原理及組成
系統(tǒng)由儲液器,、泵,、進(jìn)樣器、色譜柱,、檢測器,、記錄儀等幾部分組成。儲液器中的流動相被高壓泵打入系統(tǒng),樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動相,被流動相載入色譜柱（固定相）內(nèi),由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù),在兩相中作相對運動時,經(jīng)過反復(fù)多次的吸附-解吸的分配過程,各組分在移動速度上產(chǎn)生較大的差別,被分離成單個組分依次從柱內(nèi)流出,通過檢測器時,樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號傳送到記錄儀,數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來液相色譜儀主要有進(jìn)樣系統(tǒng),、輸液系統(tǒng),、．分離系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng),，下面將分別敘述其各自的組成與特點,。
1．進(jìn)樣系統(tǒng)
液相色譜儀
一般采用隔膜注射進(jìn)樣器或高壓進(jìn)樣間完成進(jìn)樣操作，進(jìn)樣量是恒定的。這對提高分析樣品的重復(fù)性是有益的,。
2．輸液系統(tǒng)
該系統(tǒng)包括高壓泵,、流動相貯存器和梯度儀三部分。高壓泵的一般壓強為l．47～4．4X107Pa,，流速可調(diào)且穩(wěn)定,，當(dāng)高壓流動相通過層析柱時，可降低樣品在柱中的擴散效應(yīng),，可加快其在柱中的移動速度,，這對提高分辨率、回收樣品,、保持樣品的生物活性等都是有利的,。流動相貯存錯和梯度儀，可使流動相隨固定相和樣品的性質(zhì)而改變,，包括改變洗脫液的極性,、離子強度、PH值,，或改用競爭性抑制劑或變性劑等,。這就可使各種物質(zhì)（即使僅有一個基團的差別或是同分異構(gòu)體）都能獲得有效分離。
3.分離系統(tǒng)
該系統(tǒng)包括色譜柱,、連接管和恒溫器等,。色譜柱一般長度為10～50cm（需要兩根連用時,，可在二者之間加一連接管）,，內(nèi)徑為2～5mm，由"不銹鋼或厚壁玻璃管或鈦合金等材料制成,，住內(nèi)裝有直徑為5～10μm粒度的固定相（由基質(zhì)和固定液構(gòu)成）．固定相中的基質(zhì)是由機械強度高的樹脂或硅膠構(gòu)成,，它們都有惰性（如硅膠表面的硅酸基因基本已除去）、多孔性（孔徑可達(dá)1000?）和比表面積大的特點,，加之其表面經(jīng)過機械涂漬（與氣相色譜中固定相的制備一樣）,，或者用化學(xué)法偶聯(lián)各種基因（如磷酸基、季胺基,、羥甲基,、苯基、氨基或各種長度碳鏈的烷基等）或配體的有機化合物,。因此,，這類固定相對結(jié)構(gòu)不同的物質(zhì)有良好的選擇性。例如,，在多孔性硅膠表面偶聯(lián)豌豆凝集素（PSA）后,，就可以把成纖維細(xì)胞中的一種糖蛋白分離出來。
另外，固定相基質(zhì)粒小,，柱床極易達(dá)到均勻,、致密狀態(tài)，極易降低渦流擴散效應(yīng),?；|(zhì)粒度小，微孔淺,，樣品在微孔區(qū)內(nèi)傳質(zhì)短,。這些對縮小譜帶寬度、提高分辨率是有益的,。根據(jù)柱效理論分析,，基質(zhì)粒度小，塔板理論數(shù)N就越大,。這也進(jìn)一步證明基質(zhì)粒度小,，會提高分辨率的道理。
再者,，液相色譜的恒溫器可使溫度從室溫調(diào)到60C,，通過改善傳質(zhì)速度，縮短分析時間,，就可增加層析柱的效率,。
4．檢測系統(tǒng)
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