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豬肉和牛肉組織中頭孢菌素類抗生素的固相萃取凈化方法
閱讀：4777 發(fā)布時間：2010-5-27
豬肉和牛肉組織中頭孢菌素類抗生素的固相萃取凈化方法
1. 萃取
a. 10g肌肉樣品中加入40mL醋酸銨緩沖液（pH5.0,，0.05mol/L）,，勻漿;
b. 加入10mL異辛烷,，用漩渦混合器混合均勻;
c. 2400r/min離心10min;
d. 將上清液轉(zhuǎn)移到玻璃試管中,。
2. SPE凈化
a. 活化：分別用5mL甲醇,，5mL超純水以及5mL醋酸銨緩沖液（pH5.0,，0.05mol/L）分別淋洗C18吸附劑柱床,；
b. 上樣：將玻璃試管中萃取后的上清液傾倒入SPE中,；
c. 淋洗：用2mL的醋酸銨緩沖液（pH5.0,，0.05mol/L）,，1mL的超純水和1mL的去離子水/乙腈（ 90:10，V/V） 分別淋洗柱床,，去除干擾雜質(zhì),；
d. 干燥：柱管通空氣，抽氣5min,；
e. 洗脫：加2mL去離子水/乙腈（90:10,，V/V）洗脫液，進行洗脫,，流速控制在3mL/min,，收集洗脫液；
f . 氮吹干燥：50℃ 條件下,，氮氣吹掃,，蒸發(fā)至大約4μL左右；
g. 定容：用醋酸銨緩沖液（pH7.0,，0.025mol/L）和0.1M的NaOH調(diào)節(jié)到pH7.0,，并定容至1.6mL。
3. LC-UV檢測
4. 樣品成分
頭孢喹諾
頭孢氨芐
頭孢匹林及其代謝物Desacetylcephapirin
頭孢噻呋及其代謝物Desfuroylceftiofur
a. 10g肌肉樣品中加入40mL醋酸銨緩沖液（pH5.0,，0.05mol/L）,，勻漿;
b. 加入10mL異辛烷,，用漩渦混合器混合均勻;
c. 2400r/min離心10min;
d. 將上清液轉(zhuǎn)移到玻璃試管中,。
2. SPE凈化
a. 活化：分別用5mL甲醇,，5mL超純水以及5mL醋酸銨緩沖液（pH5.0,，0.05mol/L）分別淋洗C18吸附劑柱床,；
b. 上樣：將玻璃試管中萃取后的上清液傾倒入SPE中,；
c. 淋洗：用2mL的醋酸銨緩沖液（pH5.0,，0.05mol/L）,，1mL的超純水和1mL的去離子水/乙腈（ 90:10，V/V） 分別淋洗柱床,，去除干擾雜質(zhì),；
d. 干燥：柱管通空氣，抽氣5min,；
e. 洗脫：加2mL去離子水/乙腈（90:10,，V/V）洗脫液，進行洗脫,，流速控制在3mL/min,，收集洗脫液；
f . 氮吹干燥：50℃ 條件下,，氮氣吹掃,，蒸發(fā)至大約4μL左右；
g. 定容：用醋酸銨緩沖液（pH7.0,，0.025mol/L）和0.1M的NaOH調(diào)節(jié)到pH7.0,，并定容至1.6mL。
3. LC-UV檢測
4. 樣品成分
頭孢喹諾
頭孢氨芐
頭孢匹林及其代謝物Desacetylcephapirin
頭孢噻呋及其代謝物Desfuroylceftiofur
本方法中使用的SPE柱：
Bond Elut C18（ 500mg, 6mL, PN.12102052 ）,。
Bond Elut C18（ 500mg, 6mL, PN.12102052 ）,。