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巨細(xì)胞病毒抗體IgG（CMVAb-IgG）檢測
閱讀：1255 發(fā)布時間：2010-8-10
巨細(xì)胞病毒抗體IgG（CMVAb-IgG）檢測
[測定方法] ELISA法
[方法學(xué)原理] 在微孔表面包被純化的巨細(xì)胞病毒抗原,。被稀釋過的患者血清加入微孔中。如存在巨細(xì)胞病毒抗體-IgG可與微孔上抗原相結(jié)合,。然后洗去未結(jié)合物質(zhì),，再加入酶聯(lián)液，與抗原抗體復(fù)合物結(jié)合,。洗去過量的酶聯(lián)液,。zui后加入底物和色原（顯色液）。在特定時間終止酶聯(lián)液的催化反應(yīng),。所產(chǎn)生的顏色強度與標(biāo)本中巨細(xì)胞病毒抗體-IgG含量呈正相關(guān),。通過酶標(biāo)儀與校正和對照相比，讀出結(jié)果,。
[標(biāo)本準(zhǔn)備] 靜脈抽血2ml,，不抗凝。
[試劑]
1．微孔板
2．樣品稀釋液
3．HRP-抗人IgG酶結(jié)合物
4．陰性對照
5．陽性對照
6．洗滌劑
7．TMB顯色液
8．終止液
[儀器設(shè)備] 酶標(biāo)儀或全自動酶聯(lián)免疫檢測儀,。
[測定步驟]
1．吸取5u1血清標(biāo)本加入250gl標(biāo)本稀釋液中,，做1：51稀釋。
2,。吸取l00ull稀釋過的血清,、陽性對照、陰性對照和校正液（不稀釋）,，加人微孔板內(nèi),，設(shè)空白對照l孔。振蕩,，混勻,，去除孔內(nèi)液體中氣泡，室溫環(huán)境中孵育20min,。
3,，棄去孔內(nèi)液體，用洗滌液洗5次,。
4,。每孔再加入100gl酶聯(lián)結(jié)合物，室溫環(huán)境中孵育20min。
5,。棄去孔中酶聯(lián)液,，用洗滌液洗5次。
6,，每孔加入100ul TMB顯色液,，室溫環(huán)境中孵育10min。
?,。每孔加入100ul終止液,，終止反應(yīng)，充分混勻,。
8,。用酶標(biāo)儀（波長為450nm）讀取吸光度。以待測樣本吸光度大于校正液孔吸光度為陽性,。
[注意事項]
1．整個檢測過程應(yīng)符合實驗室質(zhì)量手冊和生物安全守則規(guī)定,，嚴(yán)防交叉污染。
2．所有樣品,、洗棄液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。
3．試劑應(yīng)保存于2～8℃冰箱，使用前應(yīng)在室溫環(huán)境中平衡30min,。
4．洗滌時各孔均應(yīng)加滿洗滌液,，防止孔內(nèi)有游離酶未洗凈，每次洗板后均應(yīng)在吸水紙上拍干,。
5．血標(biāo)本應(yīng)分離出血清保存,，2～8℃可保存?d，冷凍保存可至6個月,，避免反復(fù)凍融,。
6．試劑在儲存或使用過程中，禁止過熱,、曝曬或強光,。
[正常參考值] CMVAb—IgG陰性
[臨床意義] 巨細(xì)胞病毒可引起先天性和后天性多種感染。原發(fā)性感染可引起肝炎,、傳染性單核細(xì)胞增多癥或輸血后綜合征,。宮內(nèi)感染則是由于孕婦體內(nèi)的CMV通過胎盤使胎兒在宮內(nèi)受染所致，是人巨細(xì)胞病毒感染的重要途徑之一,。受染胎兒多數(shù)為隱性感染,，但有時后果較為嚴(yán)重，尤其是在懷孕早期,，更易造成胎兒損害,。出現(xiàn)小頭畸形,、肢體畸形、先天性心臟病,、斜眼,、失明、流產(chǎn),、死胎,、早產(chǎn)等,。
CMVAb—IgM陽性表明新近存在CMV感染,，對于嬰幼兒患者可用于早期診斷。由于孕婦外周血IgM型抗體不能通過胎盤屏障,，所以若新生兒臍血CMVAb—IgM檢測陽性則可診斷CMV宮內(nèi)感染（采集臍血標(biāo)本時應(yīng)注意避免母血污染）,。嬰幼兒外周僅血清單—CMV Ab-IgM檢測陽性者，應(yīng)連續(xù)隨訪6～12個月,，觀察其滴度是否有顯著意義的升高,。成人人群中CMV Ab-IgG檢出率很高，CMVAb-IgG僅用于成人流行病學(xué)調(diào)查,。
另外,，少部分患者再次感染巨細(xì)胞病毒時，可再次出現(xiàn)CMVAb-IgM陽性,。特別是器官移植患者再次發(fā)生CMV感染時,，CMVAb-IgM重新出現(xiàn)陽性的比例非常高。