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巨細(xì)胞病毒抗體IgM（CMVAb-IgM）檢測(cè)
閱讀：655 發(fā)布時(shí)間：2010-8-10
巨細(xì)胞病毒抗體IgM（CMVAb-IgM）檢測(cè)
[測(cè)定方法] ELISA法
[方法學(xué)原理] 在微孔表面包被純化的巨細(xì)胞病毒抗原。被稀釋過(guò)的患者血清加入微孔中。如存在巨細(xì)胞病毒抗體—IgM可與微孔上抗原相結(jié)合,。然后洗去未結(jié)合物質(zhì),，再加入酶聯(lián)液，與抗原抗體復(fù)合物結(jié)合,。洗去過(guò)量的酶聯(lián)液,。zui后加入底物和色原（顯色液）。在特定時(shí)間終止酶聯(lián)液的催化反應(yīng),。所產(chǎn)生的顏色強(qiáng)度與標(biāo)本中巨細(xì)胞病毒抗體-IgM含量呈正相關(guān),。通過(guò)酶標(biāo)儀與校正和對(duì)照相比，讀出結(jié)果,。
[標(biāo)本準(zhǔn)備] 靜脈抽血2ml,，不抗凝。
[試劑]
1．微孔板
2．樣品稀釋液
3．HRP-抗人IgM酶結(jié)合物
4．陰性對(duì)照
5．陽(yáng)性對(duì)照
6．洗滌劑
7．TMB顯色液
8．終止液
[儀器設(shè)備] 酶標(biāo)儀或全自動(dòng)酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀,。
[測(cè)定步驟]
1．吸取10ul血清標(biāo)本加入25091標(biāo)本稀釋液中,，做1：26稀釋。
2．吸取100ul稀釋過(guò)的血清,、陽(yáng)性對(duì)照,、陰性對(duì)照和校正液（不稀釋），加入微孔板內(nèi),，設(shè)空白對(duì)照1孔,。振蕩，混勻,，去除孔內(nèi)液體中氣泡,，室溫環(huán)境中孵育20min。
3．棄去孔內(nèi)液體,，用洗滌液洗5次,。
4．每孔再加入100~1酶聯(lián)結(jié)合物，室溫環(huán)境中孵育20min,。
5．棄去孔中酶聯(lián)液,，用洗滌液洗5次。
6．每孔加人100ul TMB顯色液,，室溫環(huán)境中孵育10min,。
7．每孔加入100gl終止液，終止反應(yīng),，充分混勻,。
8．用酶標(biāo)儀（波長(zhǎng)為450nm）讀取吸光度。以待測(cè)樣本吸光度大于校正液孔吸光度為陽(yáng)性,。
[注意事項(xiàng)]
1．整個(gè)檢測(cè)過(guò)程應(yīng)符合實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量手冊(cè)和生物安全守則規(guī)定,，嚴(yán)防交叉污染,。
2．所有樣品、洗棄液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。
3．試劑應(yīng)保存于2～8℃冰箱,，使用前應(yīng)在室溫環(huán)境中平衡30min。
4．洗滌時(shí)各孔均應(yīng)加滿洗滌液,，防止孔內(nèi)有游離酶未洗凈,，每次洗板后均應(yīng)在吸水紙上拍干。
5．血標(biāo)本應(yīng)分離出血清保存,，2～8℃可保存7d,，冷凍保存可至6個(gè)月，避免反復(fù)凍融,。
6．試劑在儲(chǔ)存或使用過(guò)程中,，禁止過(guò)熱,、曝曬或強(qiáng)光,。
[正常參考值] 抗—CMVAb-IgM陰性