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凋亡的多參數(shù)檢測
閱讀：387 發(fā)布時間：2015-7-7大家都知道,，在細胞凋亡的早期，線粒體膜電位的下降是一個標志性的事件,。而對于線粒體膜電位的檢測,，JC-1這種親脂性陽離子染料是個很好的工具，也使用了很多年,。生物通 www.ebiotrade,。。ｃｏｍ
當線粒體膜電位較高時,，JC-1聚集在線粒體的基質(zhì)中,，形成聚合物，產(chǎn)生紅色熒光,；而當線粒體膜電位較低時,，JC-1不能聚集在線粒體的基質(zhì)中,，此時JC-1為單體，產(chǎn)生綠色熒光,。這樣就可以很方便地通過熒光顏色的轉(zhuǎn)變來檢測線粒體膜電位的變化,。人們常用紅綠熒光的相對比例來衡量線粒體膜去極化的程度。
對于傳統(tǒng)的JC-1檢測,，在使用帶有單個488 nm（藍色）激光器的流式細胞儀進行分析時,，JC-1單體和JC-1聚合物這兩個檢測通道需要熒光補償。在今年4月發(fā)表于《Current Protocols in Cytometry》的一篇文章中,，意大利摩德納大學(xué)的Sara De Biasi等人對此方法進行了改進。他們使用的是賽默飛世爾的Attune? NxT聲波聚焦流式細胞儀,。生物通 www.ebiotrade,。。ｃｏｍ
這種儀器采用模塊化設(shè)計,，配有紅,、黃、藍,、紫四個激光器,。作者認為，多激光器的使用能zui大限度減少熒光補償?shù)男枰?，從而有助于實現(xiàn)更輕松,、更的檢測。同時,，多激光器的激發(fā)也讓作者能夠檢測其他的凋亡標志物,，如PS外翻和活性氧簇的形成。
在這項研究中,，De Biasi及其同事使用兩個激光器來檢測JC-1：藍色（488 nm）激光器來激發(fā)JC-1的單體,，而黃色（561 nm）激光器來激發(fā)JC-1聚合物。他們利用纈氨霉素（valinomycin）處理U937細胞后,，開展JC-1染色,。在使用單色激光激發(fā)時，不使用補償就無法輕松分開JC-1的單體和聚合物,；不過,，在使用雙色激光激發(fā)時，就不需要熒光補償,。生物通 www.ebiotrade,。。ｃｏｍ
在同時檢測多個凋亡標志物時,，作者利用兩種額外的探針：Pacific Blue? annexin V檢測磷脂酰絲氨酸的暴露（紫色激光）,，而CellROX? Deep Red試劑檢測活性氧簇（紅色激光）,。同時使用Attune? NxT流式細胞儀上的四個激光器，作者證明了三種凋亡標志物的檢測,。他們認為,，這些方案適用于凋亡的多參數(shù)檢測。