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gⅥ-cDNA噬菌粒文庫小規(guī)模的獲取和純化
閱讀:699 發(fā)布時間:2010-7-26[器材和試劑]
●通用設(shè)備及試劑以及以下的設(shè)備和試劑:
●無菌96孔帶蓋培養(yǎng)板(Costar)
●LBAT
●R408輔助噬菌體(Stratagene)
●振蕩孵育箱
●96孔復(fù)制板
●PEG/NaCl(
●PBS
[方法]
1.將克隆體接種到100ul LBAT 96孔培養(yǎng)板上,并在37℃過夜振蕩培養(yǎng)(180r/min),。
2.使用96孔復(fù)制板將其接種到裝有200ul LBAT的第二塊96孔培養(yǎng)板上,,在37℃培養(yǎng)直到生長中期(大約1,,5小時)。
3.在每一孔中加入10ul 2×1011TU/mlR408輔助噬菌體,。
4.37℃無振蕩培養(yǎng)30分鐘,。
5.37℃過夜振蕩培養(yǎng)。
6.4℃800g離心20分鐘,,收集細(xì)胞,。
7.將上清液轉(zhuǎn)移到一新的96孔培養(yǎng)板上,并加40pul PEG/NaCl,。
8.將板放置于冰上1小時,。
9.4℃800g離心20分鐘,,收集噬菌體顆粒,小心除去上清液,,在50ulPBS溶液中打散顆粒,。