公司動(dòng)態(tài)
抗組蛋白抗體(AHA)測(cè)定
閱讀:1978 發(fā)布時(shí)間:2011-6-20 組蛋白是一種與DNA結(jié)合的富含賴氨酸與精氨酸的堿性蛋白,,由H1、U2A,、H2B,、H3、H4 5個(gè)亞單位構(gòu)成,。藥物性紅斑狼瘡和SEE病人血清中有抗組蛋白抗體(antihistonic antibody,,AHA),RA病人血清中也可測(cè)到AHA,。目前檢測(cè)AHA方法甚多,,但以EHSA法和熒光抗體法較實(shí)用。現(xiàn)介紹ELISA法檢測(cè)AHA,。
1.試劑 組蛋白抗原:可購買商品或從小牛胸腺中制備,,并經(jīng)SDS-PAGE證實(shí)有5個(gè)亞單位。
2.操作步驟 以2.5ug/mL組蛋白抗原200~L包被聚苯乙烯微孔板,,置4℃ 20h后,,棄去抗原包被液,加入0.3%明膠溶液以阻斷未被抗原包被的部位,。次日加入待測(cè)血清200uL(稀釋成1:200),,室溫孵育2h,經(jīng)PBS-吐溫及PBS緩沖液洗滌后,,加入zui適工作濃度的HRP標(biāo)記的羊抗人IRC或羊抗人IgM各200mL,,室溫孵育2h后,分別以PBS-吐溫和PBS溶液沖洗各3次,加入底物2,,2’-連氮-雙[3—乙基苯并噻唑啉-6—磺酸鹽](ABTS)200uL,,置室溫孵育2h后,以410nm測(cè)定各孔吸光度(A),。A值大于正常值范圍定為陽性,。
3.正常參考值與臨床意義 因檢測(cè)方法不同,AHA的正常值范圍也各異,。應(yīng)在建立方法后,,各自訂出正常值范圍。如唐福林等(1990)采用上述ELISA法檢測(cè)AHA的A值X二0.324,,2S:0.219(正常值范圍0.105—0.543),,A值大于0.543視為陽性。
AHA在藥物性狼瘡病人中陽性率達(dá)90%—100%,,且與Sm或RNP呈交叉反應(yīng),,而自發(fā)性SLE病人中陽性率僅為20%—35%,且大多出現(xiàn)在疾病活動(dòng)期,,抗體是H1,、H3-H4組分。以kG-AHA為主的SLE病人,,其心包炎,、腎炎、關(guān)節(jié)炎發(fā)生率高于以IgM-AHA為主的SLE病人,,因此IeC-AHA測(cè)定有助于臨床治療的監(jiān)測(cè),。BA病人的AHA陽性率也較高(可達(dá)36%),以IgM-AHA為主,,與AHA陰性者相比,,關(guān)節(jié)外表現(xiàn)更為突出,可作為診斷時(shí)參考,。