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    免疫酶染色試驗

 

    用酶標抗體直接檢測病豬組織中的病毒抗原,。感染豬瘟的腎臟皮質(zhì)部細胞被染成深褐色,。應(yīng)用內(nèi)含o．01％過氧化氫或o．01％疊氮鈉溶液的抑制內(nèi)源性酶，取得較好效果

,。

    采病豬扁桃體,、脾、腎,、淋巴結(jié)等病樣做壓印片或冰凍切片,，標本自然干燥后，在2％戊二醛和甲醛等量混合液中固定10rnin,。干燥后,，將標本浸入0．01％過氧化氫或0．01％疊氮鈉溶液的Tris-HCI緩沖液中，室溫下作用30rain,。用pHL 40．02mol／L磷酸鹽緩沖液漂洗5次,，每次3min，然后風(fēng)干,。將標本置于濕盒內(nèi),，滴加1：10酶標記抗體，37~C下3min：用pH 7．40,。02mol／L磷酸鹽緩沖液沖洗3～4次,，每次2～3min，再用無水乙醇,、二甲苯脫水,，封片檢查。結(jié)果判定：用顯微鏡檢查,，如細胞呈深褐色為陽性,；黃色或五色則為陰性。豬瘟兔化弱毒接種的豬組織細胞漿呈微褐色,，與強毒株感染有明顯區(qū)別,。

 

    免疫熒光試驗 

 

    可分為直接免疫熒光和間接免疫熒光試驗。

 

    組織直接免疫熒光試驗  采集病變典型的可疑組織或臟器,，用石蠟包埋后切片或冷凍后用冰凍切片機切成薄片,，室溫下用丙酮固定lOmin并風(fēng)干組織片，之后用PBS沖洗組織片，抗體孵育（間接熒光分兩步進行,，直接熒光為一步）,，PBS再次沖洗組織片，風(fēng)干后在熒光顯微鏡下觀察熒光染色結(jié)果,。該方法優(yōu)點：不需采集大量病變實質(zhì)組織,，操作簡單。缺點：特異性和敏感性低,，主觀性強,。

 

    間接免疫熒光試驗  在病豬組織上滴加1：4抗豬瘟陽性血清，作用30mln后洗滌再加羊抗豬IgG熒光抗體,，作用30min后,，漂洗、干燥,、鏡檢,。優(yōu)點：操作簡便，診斷迅速,。缺點：成本昂貴,，特異性差，主觀性強,，需有經(jīng)驗的檢驗員操作,，以區(qū)分好非特異性染色。