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質(zhì)體快速
閱讀：222 發(fā)布時(shí)間：2010-12-3這個(gè)方法是以phenol 及chloroform 溶菌后直接進(jìn)行電泳分析,，并未將質(zhì)體DNA與宿主細(xì)菌染色體DNA 分離，得到的DNA 也不能用限制酶作用,。但因其快速簡(jiǎn)便,，所以可藉的于短時(shí)間內(nèi)檢定大量轉(zhuǎn)形株中質(zhì)體DNA 的相對(duì)分子量，以初步篩選帶有重組質(zhì)體的轉(zhuǎn)形株,。
藥品試劑：
LB/Amp plates （LB plate 添加100 μg/mL ampicillin）
1×NET （20 mM Tris-HCl; 150 mM NaCl; 0.1 mM EDTA, pH 8.0）
PCI （25:24:1）
RNase A （1 mg/mL）
1% agarose gel
方法步驟：
1） 由前一天轉(zhuǎn)形所得的轉(zhuǎn)形株中,，挑選12~24 個(gè)單一菌落，在LB/Amp plate上劃數(shù)道短的橫線或斜線,，同時(shí)也須要接種帶有載體pQE31 的菌株,，于37℃培養(yǎng)過(guò)夜或直至菌體長(zhǎng)出。
2） 以接種環(huán)將菌體刮下,，懸濁在30 μL 1×NET 中,，震蕩混合均勻。
◆ 不要忘了pQE31/JM109,！
3） 加入30 μL PCI,，劇烈震蕩。
4） 以12,000 rpm 離心3 min （室溫）,。
5） 將上層液吸至另一支干凈離心管,，加1 μL RNase A 及3 μL 10×追蹤染劑，以50 V 進(jìn)行電泳分析,。 由于樣品中有細(xì)菌染色體DNA,，所以在加入樣品槽時(shí)需十分小心，否則DNA 極易流失在電泳緩沖液中,。 電泳后,，可由質(zhì)體DNA 的泳動(dòng)率知其相對(duì)分子量大小?！?/div>
6） 選取帶有質(zhì)體分子量大于pQE31 的菌落,，接種于3 mL LB/Amp 液體培養(yǎng)基，于37℃震蕩培養(yǎng)過(guò)夜，以抽取質(zhì)體,，進(jìn)行限制酶分析,。