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    應(yīng)用PAP法顯示抗原含量較多的組織或冰凍切片抗原保存良好的標本時,，可導(dǎo)致陰性結(jié)果,。Bigbee（1977）的研究證實，陰性結(jié)果是由于*抗體用量過高,，與組織抗原結(jié)合過多,，使相鄰兩個抗體的Fc段間的距離恰好是連接抗體的兩個Fab段結(jié)合的長度，于是連接抗體不存在游離Fab段,，僅存無活性的Fc段,，所以不能將PAP復(fù)合物連接在與組織抗原結(jié)合的*抗體上，導(dǎo)致陰性結(jié)果,。尤其是冰凍切,，而石蠟切片很少發(fā)生這種現(xiàn)象?？朔霓k法是將*抗體盡量稀釋,。

 

    2．橋抗體

 

    也稱連接抗體。它的兩個Fab段具有相同的結(jié)構(gòu),、性質(zhì)及與抗原結(jié)合的能力,，因此，當*抗體和PAP復(fù)合中抗HRP抗體來自同一種屬動物時,，橋抗體能同時與上述二種抗體結(jié)合，起到橋的作用,。為了確保橋抗體的二個Fab段之一與*抗體結(jié)合,，另一個與抗HRP抗體結(jié)合，橋抗體的濃度必須高于常規(guī)用的第二抗體,。

 

    3．PAP復(fù)合物

 

在PAP法和酶橋法中,，特別強調(diào)*抗體和抗HRP必須來自同一種屬，橋抗體才能發(fā)揮橋的作用,，將其連接在一起,。