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    DNA探針一般可以用32P, 35S或非放射性物質如biotin及digoxigenin （DIG） 加以標定,；標定時利用DNA聚合酶的活性，在DNA聚合反應中，另加入 [α-32P] dATP,[α-32P] dCTP或DIG-11-dUTP等標定物質,，所合成出來的即是被標定的核酸片段,。目前常見的方法包括nick translation, random priming與polymerase chain reaction（PCR） 等。 若須對DNA進行end labeling時,，可以進行kinase或filling-in reaction,。

 

    前者以 [γ-32P] ATP為phosphate donor，利用T4 polynucleotide kinase的活性對帶有5’-OH的DNA進行標定,。人工合成的寡核苷酸 （oligonucleotides） 5’端為-OH group,，可直接用于kinase reaction；一般DNA片段,，若5’端帶有phosphate group,，先經phosphatase處理，再進行kinase reaction,。 Filling-in reaction是將DNA以特定限制酶切開,，露出recessed 3’ termini后，利用Klenow的活性把3’端補齊 （filling-in）,；因此,，只要加入適當?shù)?[α-32P] dNTP，即可在DNA的3’端進行標定,。

 

    此外,，也可以應用bacteriophage T4 DNA polymerase 的3’→5’ exonuclease 活性制造recessed 3’termini，再進行filling-in,。 至于正意股或反意股RNA探針,，則可以 [α-32P] UTP或DIG-11-UTP等為標定物質，應用胞外轉錄反應加以標定,。 下面要介紹的是目前zui常用的方法：random priming及PCR,。