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大鼠環(huán)氧合酶2（COX-2）Elisa試劑盒說明書
閱讀：568 發(fā)布時(shí)間：2011-1-13| 提 供 商 | 上海源葉生物科技有限公司 | 資料大小 | 0K |
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【大鼠環(huán)氧合酶2（COX-2）Elisa試劑盒試劑盒名稱】
大鼠環(huán)氧合酶2（COX-2）定量檢測試劑盒（ELISA）
【大鼠環(huán)氧合酶2（COX-2）Elisa試劑盒試劑盒用途】
定量檢測大鼠血清,、血漿及相關(guān)液體樣本中環(huán)氧合酶2（COX-2）的含量,。
【大鼠環(huán)氧合酶2（COX-2）Elisa試劑盒檢測原理】
本試劑盒采用雙抗體兩步夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）,。將標(biāo)準(zhǔn)品、待測樣本加入到預(yù)先包被大鼠環(huán)氧合酶2（COX-2）單克隆抗體透明酶標(biāo)包被板中,，溫育足夠時(shí)間后,，洗滌除去未結(jié)合的成分，再加入酶標(biāo)工作液,，溫育足夠時(shí)間后,，洗滌除去未結(jié)合的成分。依次加入底物A,、B,，底物（TMB）在辣根過氧化物酶（HRP）催化下轉(zhuǎn)化為藍(lán)色產(chǎn)物，在酸的作用下變成黃色,，顏色的深淺與樣品中大鼠環(huán)氧合酶2（COX-2）濃度呈正相關(guān),，450nm波長下測定OD值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的OD值,，計(jì)算樣本中大鼠環(huán)氧合酶2（COX-2）含量,。
【大鼠環(huán)氧合酶2（COX-2）Elisa試劑盒試劑盒組成】
| 1 | 酶標(biāo)包被板 | 12孔×8條 | 7 | 顯色劑A液 | 6mL |
| 2 | 標(biāo)準(zhǔn)品 | 0.3mL×6管 | 8 | 顯色劑B液 | 6mL |
| 3 | 20倍濃縮洗滌液 | 25mL | 9 | 終止液 | 6mL |
| 4 | 樣本稀釋液 | 6mL | 10 | 說明書 | 1份 |
| 5 | 特殊稀釋液 | 6mL | 11 | 封板膜 | 2張 |
| 6 | 酶標(biāo)試劑 | 6mL | 12 | 密封袋 | 1個 |
備注：標(biāo)準(zhǔn)品（1號→6號）濃度依次為：160、80,、40,、20,、10、5 U/L
【大鼠環(huán)氧合酶2（COX-2）Elisa試劑盒需要而未提供的試劑和器材】
1,、37℃恒溫箱
2,、標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀
3、精密移液器及一次性吸頭
4,、蒸餾水
5,、一次性試管
6、吸水紙
【大鼠環(huán)氧合酶2（COX-2）Elisa試劑盒操作步驟】
1,、準(zhǔn)備：從冰箱取出試劑盒,，室溫復(fù)溫平衡30分鐘。
2,、配液：用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液,。
3、加標(biāo)準(zhǔn)品和待測樣本：取足夠數(shù)量的酶標(biāo)包被板,，固定于框架上,，分別設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測樣本孔和空白對照孔,，記錄各孔位置,，在標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品50μL；待測樣本孔中先加入待測樣本10μL,，再加樣本稀釋液40μL（即樣本稀釋5倍）,；空白對照孔不加。
4,、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min,。
5、洗板：棄去液體,，吸水紙上拍干,，每孔加滿洗滌液，靜置1min,，甩去洗滌液，吸水紙上拍干,，如此重復(fù)洗板4次（也可用洗板機(jī)按說明書操作洗板）,。
6、加酶標(biāo)工作液：每孔加入酶標(biāo)工作液50μL,，空白對照孔不加,。
7、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min,。
8,、洗板：棄去液體,，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液,，靜置1min,，甩去洗滌液，吸水紙上拍干,，如此重復(fù)洗板4次（也可用洗板機(jī)按說明書操作洗板）,。
9、顯色：每孔先加入顯色劑A 液50μL,，再加入顯色劑B液 50μL,，平板混勻器混勻30s（或用手輕輕震蕩混勻30s），37℃避光顯色15min,。
10,、終止：取出酶標(biāo)板，每孔加終止液50μL,，終止反應(yīng)（顏色由藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）,。
11、測定：以空白孔調(diào)零,，在終止后15分鐘內(nèi),，用450nm波長測量各孔的吸光值（OD值）。
12,、計(jì)算：根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對應(yīng)的OD值,，計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程，再根據(jù)樣本的OD值,，在回歸方程上計(jì)算出對應(yīng)的樣品濃度,，也可以使用各種應(yīng)用軟件來計(jì)算。zui終濃度為實(shí)際測定濃度乘以稀釋倍數(shù),。
【大鼠環(huán)氧合酶2（COX-2）Elisa試劑盒樣本要求】
1,、樣本不能含疊氮鈉（NaN3），因?yàn)?/span>疊氮鈉（NaN3）是辣根過氧化物酶（HRP）的抑制劑,。
2,、標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn),。若不能立即試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。
3、樣本應(yīng)充分離心，不得有溶血及顆粒,。
【大鼠環(huán)氧合酶2（COX-2）Elisa試劑盒注意事項(xiàng)】
1,、實(shí)驗(yàn)嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，實(shí)驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn),。
2,、酶標(biāo)包被板開封后如未用完，應(yīng)立即裝入密封袋中加干燥劑保存,。
3,、建議所有的標(biāo)準(zhǔn)品、樣本和空白對照都做雙份檢測,，取平均值,，以減小實(shí)驗(yàn)誤差。
4,、牢記樣本已經(jīng)稀釋5倍,，計(jì)算結(jié)果乘以5才是樣本實(shí)際濃度。
5,、本試劑盒定量范圍為5-160 U/L,，超過此范圍，為標(biāo)準(zhǔn)曲線延伸計(jì)算所得,，不做為準(zhǔn)確定量結(jié)果,，請用特殊稀釋液稀釋后測定準(zhǔn)確結(jié)果（5-160 U/L范圍內(nèi)），乘以總稀釋倍數(shù)即為樣本zui終濃度,。
6,、若顯色過淺，可適當(dāng)延長底物溫育時(shí)間,。
7,、為避免交叉污染，標(biāo)準(zhǔn)品,、樣本和空白對照每加一個就要更換一次吸頭,；酶標(biāo)工作液、樣本稀釋液和底物等公共組分,，要懸臂加樣,，不得碰到微孔；不得重復(fù)使用封板膜,。
8,、試劑盒保質(zhì)期內(nèi)使用，不同批號的試劑不得混用,。
9,、底物B對光敏感，避免長時(shí)間暴露于光下,。
【大鼠環(huán)氧合酶2（COX-2）Elisa試劑盒操作程序總結(jié)】
準(zhǔn)備試劑,，樣品和標(biāo)準(zhǔn)品
加入準(zhǔn)備好的樣品和標(biāo)準(zhǔn)品，37℃反應(yīng)30分鐘
洗板4次,，加入酶標(biāo)試劑,，37℃反應(yīng)30分鐘
洗板4次，加入顯色液A,、B,，37℃顯色15分鐘
加入終止液
15分鐘之內(nèi)讀OD值
計(jì)算
【大鼠環(huán)氧合酶2（COX-2）Elisa試劑盒檢測范圍】
5 U/L - 160 U/L
【大鼠環(huán)氧合酶2（COX-2）Elisa試劑盒規(guī)格】
96人份/盒
【大鼠環(huán)氧合酶2（COX-2）Elisa試劑盒貯藏】
2-8℃，避光防潮保存,。
【大鼠環(huán)氧合酶2（COX-2）Elisa試劑盒有效期】
6個月