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人癌胚抗原（CEA）Elisa試劑盒試劑盒名稱】

人癌胚抗原（CEA）定量檢測試劑盒（ELISA）

【人癌胚抗原（CEA）Elisa試劑盒試劑盒用途】

定量檢測人血清,、血漿及相關液體樣本中癌胚抗原（CEA）的含量,。

【人癌胚抗原（CEA）Elisa試劑盒檢測原理】

本試劑盒采用雙抗體兩步夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）。將標準品,、待測樣本加入到預先包被人癌胚抗原（CEA）單克隆抗體透明酶標包被板中,，溫育足夠時間后，洗滌除去未結合的成分,，再加入酶標工作液，溫育足夠時間后，洗滌除去未結合的成分,。依次加入底物A、B,，底物（TMB）在辣根過氧化物酶（HRP）催化下轉化為藍色產物,，在酸的作用下變成黃色，顏色的深淺與樣品中人癌胚抗原（CEA）濃度呈正相關,，450nm波長下測定OD值,，根據(jù)標準品和樣品的OD值，計算樣本中人癌胚抗原（CEA）含量,。

【人癌胚抗原（CEA）Elisa試劑盒試劑盒組成】

1
酶標包被板
12孔×8條
7
顯色劑A液
6mL

2
標準品
0.3mL×6管
8
顯色劑B液
6mL

3
20倍濃縮洗滌液
25mL
9
終止液
6mL

4
樣本稀釋液
6mL
10
說明書
1份

5
特殊稀釋液
6mL
11
封板膜
2張

6
酶標試劑
6mL
12
密封袋
1個
 

備注：標準品（1號→6號）濃度依次為：2400,、1200、600,、300,、150、75ng/L.

【人癌胚抗原（CEA）Elisa試劑盒需要而未提供的試劑和器材】

1,、37℃恒溫箱

2,、標準規(guī)格酶標儀

3、精密移液器及一次性吸頭

4,、蒸餾水

5,、一次性試管

6、吸水紙

【人癌胚抗原（CEA）Elisa試劑盒操作步驟】

1,、準備：從冰箱取出試劑盒,，室溫復溫平衡30分鐘,。

2、配液：用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液,。

3,、加標準品和待測樣本：取足夠數(shù)量的酶標包被板，固定于框架上,，分別設置標準品孔,、待測樣本孔和空白對照孔，記錄各孔位置,，在標準品孔中加入標準品50μL,；待測樣本孔中先加入待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL（即樣本稀釋5倍）,；空白對照孔不加,。

4、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min,。

5,、洗板：棄去液體，吸水紙上拍干,，每孔加滿洗滌液,，靜置1min，甩去洗滌液,，吸水紙上拍干,，如此重復洗板4次（也可用洗板機按說明書操作洗板）。

6,、加酶標工作液：每孔加入酶標工作液50μL,，空白對照孔不加。

7,、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min,。

8、洗板：棄去液體,，吸水紙上拍干,，每孔加滿洗滌液，靜置1min,，甩去洗滌液,，吸水紙上拍干，如此重復洗板4次（也可用洗板機按說明書操作洗板）,。

9,、顯色：每孔先加入顯色劑A 液50μL，再加入顯色劑B液 50μL,，平板混勻器混勻30s（或用手輕輕震蕩混勻30s）,，37℃避光顯色15min,。

10、終止：取出酶標板,，每孔加終止液50μL,，終止反應（顏色由藍色立轉黃色）。

11,、測定：以空白孔調零,，在終止后15分鐘內，用450nm波長測量各孔的吸光值（OD值）,。

12,、計算：根據(jù)標準品的濃度及對應的OD值，計算出標準曲線的直線回歸方程,，再根據(jù)樣本的OD值,，在回歸方程上計算出對應的樣品濃度，也可以使用各種應用軟件來計算,。zui終濃度為實際測定濃度乘以稀釋倍數(shù),。

【人癌胚抗原（CEA）Elisa試劑盒樣本要求】

1、樣本不能含疊氮鈉（NaN3）,，因為疊氮鈉（NaN3）是辣根過氧化物酶（HRP）的抑制劑,。

2、標本采集后盡早進行提取,，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗,。若不能立即試驗,，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融,。

3,、樣本應充分離心，不得有溶血及顆粒,。

【人癌胚抗原（CEA）Elisa試劑盒注意事項】

1,、實驗嚴格按照說明書的操作進行，實驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準,。

2,、酶標包被板開封后如未用完，應立即裝入密封袋中加干燥劑保存,。

3,、建議所有的標準品、樣本和空白對照都做雙份檢測,，取平均值,，以減小實驗誤差,。

4、牢記樣本已經稀釋5倍,，計算結果乘以5才是樣本實際濃度,。

5、本試劑盒定量范圍為75-2400ng/L,，超過此范圍,，為標準曲線延伸計算所得，不做為準確定量結果,，請用特殊稀釋液稀釋后測定準確結果（75-2400ng/L范圍內）,，乘以總稀釋倍數(shù)即為樣本zui終濃度。

6,、若顯色過淺,，可適當延長底物溫育時間。

7,、為避免交叉污染,，標準品、樣本和空白對照每加一個就要更換一次吸頭,；酶標工作液,、樣本稀釋液和底物等公共組分，要懸臂加樣,，不得碰到微孔,；不得重復使用封板膜。

8,、試劑盒保質期內使用,，不同批號的試劑不得混用。

9,、底物B對光敏感,，避免長時間暴露于光下。