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小鼠B細(xì)胞淋巴瘤因子2（Bcl-2）ELisa試劑盒說(shuō)明書
閱讀：591 發(fā)布時(shí)間：2011-1-13| 提 供 商 | 上海源葉生物科技有限公司 | 資料大小 | 0K |
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【小鼠B細(xì)胞淋巴瘤因子2（Bcl-2）試劑盒名稱】
小鼠B細(xì)胞淋巴瘤因子2（Bcl-2）定量檢測(cè)試劑盒（ELISA）
【小鼠B細(xì)胞淋巴瘤因子2（Bcl-2）試劑盒用途】
定量檢測(cè)小鼠血清、血漿,、組織液及相關(guān)液體樣本中B細(xì)胞淋巴瘤因子2（Bcl-2）的含量,。
【小鼠B細(xì)胞淋巴瘤因子2（Bcl-2）檢測(cè)原理】
本試劑盒采用雙抗體兩步夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）。將標(biāo)準(zhǔn)品,、待測(cè)樣本加入到預(yù)先包被小鼠B細(xì)胞淋巴瘤因子2（Bcl-2）單克隆抗體透明酶標(biāo)包被板中,，溫育足夠時(shí)間后，洗滌除去未結(jié)合的成分,，再加入酶標(biāo)工作液,，溫育足夠時(shí)間后，洗滌除去未結(jié)合的成分,。依次加入底物A,、B，底物（TMB）在辣根過(guò)氧化物酶（HRP）催化下轉(zhuǎn)化為藍(lán)色產(chǎn)物,，在酸的作用下變成黃色,，顏色的深淺與樣品中小鼠B細(xì)胞淋巴瘤因子2（Bcl-2）濃度呈正相關(guān)，450nm波長(zhǎng)下測(cè)定OD值,，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的OD值,，計(jì)算樣本中小鼠B細(xì)胞淋巴瘤因子2（Bcl-2）含量。
【小鼠B細(xì)胞淋巴瘤因子2（Bcl-2）試劑盒組成】
| 1 | 酶標(biāo)包被板 | 12孔×4條 | 7 | 顯色劑A液 | 3mL |
| 2 | 標(biāo)準(zhǔn)品 | 0.3mL×6管 | 8 | 顯色劑B液 | 3mL |
| 3 | 20倍濃縮洗滌液 | 15mL | 9 | 終止液 | 3mL |
| 4 | 樣本稀釋液 | 3mL | 10 | 說(shuō)明書 | 1份 |
| 5 | 特殊稀釋液 | 3mL | 11 | 封板膜 | 2張 |
| 6 | 酶標(biāo)試劑 | 3mL | 12 | 密封袋 | 1個(gè) |
備注：標(biāo)準(zhǔn)品（1號(hào)→6號(hào)）濃度依次為：120,、60,、30、15,、7.5,、3.75 ng/L.
【小鼠B細(xì)胞淋巴瘤因子2（Bcl-2）需要而未提供的試劑和器材】
1、37℃恒溫箱
2,、標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀
3,、精密移液器及一次性吸頭
4,、蒸餾水
5,、一次性試管
6、吸水紙
【小鼠B細(xì)胞淋巴瘤因子2（Bcl-2）操作步驟】
1,、準(zhǔn)備：從冰箱取出試劑盒,，室溫復(fù)溫平衡30分鐘,。
2、配液：用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液,。
3,、加標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)樣本：取足夠數(shù)量的酶標(biāo)包被板，固定于框架上,，分別設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔,、待測(cè)樣本孔和空白對(duì)照孔，記錄各孔位置,，在標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品50μL,；待測(cè)樣本孔中先加入待測(cè)樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL（即樣本稀釋5倍）,；空白對(duì)照孔不加,。
4、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min,。
5,、洗板：棄去液體，吸水紙上拍干,，每孔加滿洗滌液,，靜置1min，甩去洗滌液,，吸水紙上拍干,，如此重復(fù)洗板4次（也可用洗板機(jī)按說(shuō)明書操作洗板）。
6,、加酶標(biāo)工作液：每孔加入酶標(biāo)工作液50μL,，空白對(duì)照孔不加。
7,、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min,。
8、洗板：棄去液體,，吸水紙上拍干,，每孔加滿洗滌液，靜置1min,，甩去洗滌液,，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板4次（也可用洗板機(jī)按說(shuō)明書操作洗板）,。
9,、顯色：每孔先加入顯色劑A 液50μL，再加入顯色劑B液 50μL,，平板混勻器混勻30s（或用手輕輕震蕩混勻30s）,，37℃避光顯色15min,。
10、終止：取出酶標(biāo)板,，每孔加終止液50μL,，終止反應(yīng)（顏色由藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
11,、測(cè)定：以空白孔調(diào)零,，在終止后15分鐘內(nèi)，用450nm波長(zhǎng)測(cè)量各孔的吸光值（OD值）,。
12,、計(jì)算：根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對(duì)應(yīng)的OD值，計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程,，再根據(jù)樣本的OD值,，在回歸方程上計(jì)算出對(duì)應(yīng)的樣品濃度，也可以使用各種應(yīng)用軟件來(lái)計(jì)算,。zui終濃度為實(shí)際測(cè)定濃度乘以稀釋倍數(shù),。
【小鼠B細(xì)胞淋巴瘤因子2（Bcl-2）樣本要求】
1、樣本不能含疊氮鈉（NaN3）,，因?yàn)?/span>疊氮鈉（NaN3）是辣根過(guò)氧化物酶（HRP）的抑制劑,。
2、標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能立即試驗(yàn),，可將標(biāo)本放于-20℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3,、樣本應(yīng)充分離心,，不得有溶血及顆粒。
【小鼠B細(xì)胞淋巴瘤因子2（Bcl-2）注意事項(xiàng)】
1,、實(shí)驗(yàn)嚴(yán)格按照說(shuō)明書的操作進(jìn)行,，實(shí)驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。
2,、酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完,，應(yīng)立即裝入密封袋中加干燥劑保存。
3,、建議所有的標(biāo)準(zhǔn)品,、樣本和空白對(duì)照都做雙份檢測(cè)，取平均值，以減小實(shí)驗(yàn)誤差,。
4、牢記樣本已經(jīng)稀釋5倍,，計(jì)算結(jié)果乘以5才是樣本實(shí)際濃度,。
5、本試劑盒定量范圍為3.75-120ng/L,，超過(guò)此范圍,，為標(biāo)準(zhǔn)曲線延伸計(jì)算所得，不做為準(zhǔn)確定量結(jié)果,，請(qǐng)用特殊稀釋液稀釋后測(cè)定準(zhǔn)確結(jié)果（3.75-120ng/L范圍內(nèi)）,，乘以總稀釋倍數(shù)即為樣本zui終濃度。
6,、若顯色過(guò)淺,，可適當(dāng)延長(zhǎng)底物溫育時(shí)間。
7,、為避免交叉污染,，標(biāo)準(zhǔn)品、樣本和空白對(duì)照每加一個(gè)就要更換一次吸頭,；酶標(biāo)工作液,、樣本稀釋液和底物等公共組分，要懸臂加樣,，不得碰到微孔,；不得重復(fù)使用封板膜。
8,、試劑盒保質(zhì)期內(nèi)使用,，不同批號(hào)的試劑不得混用。
9,、底物B對(duì)光敏感,，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。