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 如何選擇合適的蛋白酶抑制劑[選擇寶典]

 

　　即使蛋白酶對(duì)細(xì)胞功能很重要，但你也有不想見(jiàn)到它們的時(shí)候,。比如,，在純化蛋白質(zhì)的時(shí)候，你可不想讓蛋白酶大肆吞噬你的目標(biāo)蛋白吧,，特別是低豐度蛋白,。如今，市場(chǎng)上有多種蛋白酶抑制劑可供選擇,，幫助你在必要時(shí)停止蛋白酶的活性,。 

 

即使蛋白酶對(duì)細(xì)胞功能很重要，但你也有不想見(jiàn)到它們的時(shí)候。比如,，在純化蛋白質(zhì)的時(shí)候,，你可不想讓蛋白酶大肆吞噬你的目標(biāo)蛋白吧，特別是低豐度蛋白,。如今,，市場(chǎng)上有多種蛋白酶抑制劑可供選擇，幫助你在必要時(shí)停止蛋白酶的活性,。

為了對(duì)付細(xì)胞和組織樣品中存在的各種蛋白酶,，抑制劑的選擇也在不斷增加。目前,，主要有四種類型的蛋白酶,，根據(jù)他們活性位點(diǎn)中的氨基酸命名：絲氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶,、天冬氨酸蛋白酶和金屬蛋白酶,。蛋白酶抑制劑可以特異針對(duì)一種蛋白酶，也可以是廣譜的,。生物通 www.ebiotrade,。。ｃｏｍ 

人們通常根據(jù)抑制劑作用的蛋白酶類型,，以及它們可逆或不可逆,，對(duì)蛋白酶抑制劑進(jìn)行分類。如何選擇和使用,？這似乎是一個(gè)難題,，光看名字就已經(jīng)讓人頭暈了。下面讓我們來(lái)聽(tīng)聽(tīng)專業(yè)人士的建議,。

從雞尾酒開(kāi)始

蛋白酶抑制劑的選擇,，取決于每個(gè)用戶的個(gè)性化實(shí)驗(yàn)，不過(guò)對(duì)于裂解細(xì)胞或勻漿組織的應(yīng)用,，抑制劑混合物（或者說(shuō)雞尾酒）通常是個(gè)比較保險(xiǎn)的選擇,，可阻斷不同的蛋白酶。Abbexazui的抑制劑就是兩種混合物：Protease Inhibitor Cocktail Multipurpose以及Protease, Phosphatase & PMSF,；這兩者都適用于裂解液,。“它們普遍適用，適合許多樣品,，無(wú)論是新鮮還是FFPE組織,，抑或不同的物種，”Abbexa的Sabrina Calabressi談道,。

若研究人員希望保留目的蛋白,，同時(shí)維持細(xì)胞健康,，默克密理博的Chandra Mohan也建議使用抑制劑混合物。她建議選擇針對(duì)四種蛋白酶的抑制劑,，如默克密理博的Protease Inhibitor Cocktail III,。它可抑制哺乳動(dòng)物細(xì)胞和組織中的天冬氨酸、半胱氨酸和絲氨酸蛋白酶以及氨肽酶,。生物通 www.ebiotrade,。。ｃｏｍ 

有時(shí),，不那么特異的抑制劑似乎是個(gè)更好的選擇,。“在裂解細(xì)胞或制備組織勻漿液時(shí)，使用具有廣譜特異性的抑制劑,，”Mohan說(shuō),。“它們應(yīng)當(dāng)快速反應(yīng)，與蛋白酶不可逆結(jié)合,，并在蛋白純化后輕松去除,。”

盡管如此，選擇困難癥還是圍繞著你,。Abbexa認(rèn)為,，嘗試不同的類型是供應(yīng)商的責(zé)任，而不是研究人員的,。這家公司建議你和供應(yīng)商交流,，讓他們將利用自己的專業(yè)知識(shí)來(lái)幫你選擇。通常,，Abbexa在了解研究人員的特定分析、樣品類型和應(yīng)用之后,，才推薦*的抑制劑,。

考慮作用機(jī)制

對(duì)于某些類型的實(shí)驗(yàn)，你也許要在更小的范圍內(nèi)搜索抑制劑,。根據(jù)Mohan的建議,，你需要先確定阻斷的是哪種類型的蛋白酶，然后再選擇合適的抑制劑,。因?yàn)椴煌囊种苿┯胁煌淖饔脵C(jī)制,。

“蛋白酶抑制劑可能是可逆的，也可能是不可逆的,，它們通過(guò)空間位阻來(lái)防止底物靠近活性位點(diǎn),，”Mohan說(shuō)。其他抑制劑可能通過(guò)修飾蛋白酶活性位點(diǎn)的氨基酸來(lái)發(fā)揮作用,。“比如,，PMSF可讓絲氨酸蛋白酶失活,，它與活性絲氨酸發(fā)生反應(yīng)，其中氯甲基酮衍生物與活性位點(diǎn)中的催化三聯(lián)體反應(yīng),，”Mohan談道,。

先廣泛，后具體

如今,，抑制劑用在各種各樣的應(yīng)用中,，這也是人們需要謹(jǐn)慎選擇的一個(gè)原因。“下游的處理和分析,，將決定蛋白酶抑制劑的選擇和使用,，”Sigma-Aldrich的市場(chǎng)部Robert Gates談道。例如,，他補(bǔ)充說(shuō),，“液相蛋白質(zhì)組分析（如血清）可能需要蛋白酶的立即抑制，因?yàn)樗鼈儠?huì)水解低豐度的目標(biāo)蛋白,。”

事實(shí)上,，目前有這么多類型的抑制劑，將它們分門別類還真是很困難,。在選擇蛋白酶抑制劑時(shí),，Gates建議從廣泛的開(kāi)始，然后不斷縮小范圍,。“*步可能是嘗試預(yù)先配置的雞尾酒,，”他說(shuō)。“如果蛋白水解仍然存在,，可以采取針對(duì)特定組織和蛋白的方法,。”

“我們的MS-Safe抑制劑混合物避免了PMSF和AEBSF抑制劑對(duì)蛋白的修飾，也解決了磷酸酶的抑制,，”Gates說(shuō),。“在理想情況下，以后我們向樣品中添加一種混合物,，就能停止所有的蛋白水解,，并且通過(guò)抑制磷酸酶、激酶,、糖基轉(zhuǎn)移酶和糖苷酶的活性,，凍結(jié)翻譯后的修飾。”

我們是否能使用更少的抑制劑來(lái)抑制更多的蛋白酶,，這還有待觀察,。不過(guò)，在這么多的選擇中,，你肯定能找到一種有效的蛋白酶抑制劑,，這是毫無(wú)疑問(wèn)的,。