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牛傳染性支氣管炎酶聯(lián)免疫（ELISA）
閱讀：623 發(fā)布時(shí)間：2010-5-17藥品名稱：
通用名：牛傳染性支氣管炎酶聯(lián)免疫分析試劑盒
使用目的：
本試劑盒定性測定牛血液,、或其它相關(guān)組織中傳染性支氣管炎
實(shí)驗(yàn)原理：
本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫法（ELISA）測定標(biāo)本中牛傳染性支氣管炎。用純化的牛傳染性支氣管炎抗體包被微孔板,，制成固相抗體,，可與樣品中牛傳染性支氣管炎相結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與HRP標(biāo)記的牛傳染性支氣管炎抗體結(jié)合,，形成抗原-抗體-酶標(biāo)抗原復(fù)合物,，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），與CUTOFF值相比較,，從而判定標(biāo)本中牛傳染性支氣管炎的存在與否,。
試劑盒組成：
1 20倍濃縮洗滌液 30ml×1瓶 7 終止液 6ml×1瓶
2 酶標(biāo)試劑 6ml×1/瓶 8 陽性對(duì)照 0.5ml×1瓶
3 酶標(biāo)包被板 12孔×8條 9 陰性對(duì)照 0.5ml×1瓶
4 樣品稀釋液 6ml×1瓶 10 說明書 1份
5 顯色劑A液 6ml×1瓶 11 封板膜 2張
6 顯色劑B液 6ml×1瓶 12 密封袋 1個(gè)
標(biāo)本要求：
1．標(biāo)本處理：血清、血漿標(biāo)本可直接檢測
2．標(biāo)本按要求制備后盡早進(jìn)行實(shí)驗(yàn),。如不能及時(shí)檢測，可將標(biāo)本在-20℃保存一個(gè)月,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。
3．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。
操作步驟：
1. 編號(hào)：將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào),，每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照2孔、陽性對(duì)照2孔,、空白對(duì)照1孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,，其余各步操作相同）
2. 加樣：分別在陰、陽性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照,、陽性對(duì)照50μl,。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl,。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻,，
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。
4. 配液：將20倍濃縮洗滌液加蒸餾水至600ml后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體，甩干,，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次,，拍干,。
6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外,。
7. 溫育：操作同3,。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A 50μl,，再加入顯色劑B 50μl,，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘
10. 終止：每孔加終止液50μl,，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）,。
11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）,。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行,。
結(jié)果判定：
試驗(yàn)有效性：陽性對(duì)照孔平均值≥1.00; 陰性對(duì)照平均值≤0.10
臨界值（CUT OFF）計(jì)算：臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.15
陰性判定：樣品OD值< 臨界值（CUT OFF）者為牛傳染性支氣管炎陰性
陽性判定：樣品OD值≥ 臨界值（CUT OFF）者為牛傳染性支氣管炎陽性
注意事項(xiàng)
1．操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行，本試劑不同批號(hào)組分不得混用,。
2．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。
3．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果,。
4． 封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染。
5．底物請(qǐng)避光保存,。
6．試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn),，使用雙波長檢測時(shí)，參考波長為630nm
7．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。終止液為2M的硫酸，使用時(shí)必須注意安全,。
規(guī)格：
96人份/盒
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：,；2-8℃。
2．有效期：6個(gè)月