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牛γ干擾素（IFN-γ）酶聯(lián)免疫（ELISA）
閱讀：1050 發(fā)布時間：2010-5-12試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
藥品名稱：
通用名：牛γ干擾素（IFN-γ）酶聯(lián)免疫診斷試劑盒
使用目的：
本試劑盒用于測定牛血清,、血漿,、或其它相關組織液中γ干擾素（IFN-γ）含量。
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中牛γ干擾素（IFN-γ）水平,。用純化的牛γ干擾素（IFN-γ）抗體包被微孔板,，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入γ干擾素（IFN-γ）,，再與HRP標記的羊抗鼠受體結(jié)合,，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色,。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的γ干擾素（IFN-γ）呈正相關,。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值）,，通過標準曲線計算樣品中牛γ干擾素（IFN-γ）含量,。
試劑盒組成
1 20倍濃縮洗滌液 30ml×1瓶 7 終止液 6ml×1瓶
2 酶標試劑 6ml×1瓶 8 標準品（1800ng/L） 0.5ml×1瓶
3 酶標包被板 12孔×8條 9 標準品稀釋液 1.5ml×1瓶
4 樣品稀釋液 6ml×1瓶 10 說明書 1份
5 顯色劑A液 6ml×1瓶 11 封板膜 2張
6 顯色劑B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1個
標本處理及要求
1．血清、血漿,、腦脊液、腹腔液標本可直接測定,；
2．不能檢測含NaN3的樣品,，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
3．采集后盡早進行實驗,，若不能馬上進行試驗,，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融,。
操作步驟
1. 標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔10孔,，在*、第二孔中分別加標準品100μl,，然后在*,、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻,；再各取100μl分別加到第三孔和第四孔,，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,，混勻后,，在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五,、第六孔中,，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,，混勻,；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七,、第八孔中,，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,，混勻后從第七,、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl,，濃度分別為1200ng/L,，800ng/L ,，400ng/L，200ng/L,，100ng/L）,。
2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）,、待測樣品孔,。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）,。加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻,。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。
4. 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體,，甩干,，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去,，如此重復5次,，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl,，空白孔除外,。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5,。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl,，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
11. 測定：以空白空調(diào)零,，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）,。 測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。
計算
以標準物的濃度為橫坐標,，OD值為縱坐標,，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度,；再乘以稀釋倍數(shù),；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度,，再乘以稀釋倍數(shù),，即為樣品的實際濃度。
注意事項
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,，酶標包被板開封后如未用完,，板條應裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,，稀釋時可在水浴中加溫助溶,，洗滌時不影響結(jié)果。
3．各步加樣均應使用加樣器,，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差,。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi),，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣,。
4． 請每次測定的同時做標準曲線,，做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值）,，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定,，計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
5． 封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染,。
6．底物請避光保存。
7．嚴格按照說明書的操作進行,，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9．本試劑不同批號組分不得混用,。
10. 如與英文說明書有異,，以英文說明書為準。
檢測范圍：
50ng/L -1500ng/ml
規(guī)格：
96人份/盒
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：,；2-8℃,。
2．有效期：6個月