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試劑盒使用說(shuō)明書(shū)
本試劑盒僅供研究使用,。
藥品名稱：
通用名：雞白細(xì)胞介素-4（IL-4）酶聯(lián)免疫分析試劑盒
使用目的：
本試劑盒用于測(cè)定雞血清,、血漿、或其它相關(guān)組織液中白細(xì)胞介素-4（IL-4）含量,。
實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中雞白細(xì)胞介素-4（IL-4）水平,。用純化的雞白細(xì)胞介素-4（IL-4）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入白細(xì)胞介素-4（IL-4）,，再與HRP標(biāo)記的IL-4抗體結(jié)合,，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB顯色,。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的白細(xì)胞介素-4（IL-4）呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中雞白細(xì)胞介素-4（IL-4）含量,。
試劑盒組成
1 20倍濃縮洗滌液 20ml×1瓶 7 終止液 3ml×1瓶
2 酶標(biāo)試劑 3ml×1瓶 8 標(biāo)準(zhǔn)品（180ng/L） 0.5ml×1瓶
3 酶標(biāo)包被板 12孔×4條 9 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 1.5ml×1瓶
4 樣品稀釋液 3ml×1瓶 10 說(shuō)明書(shū) 1份
5 顯色劑A液 3ml×1瓶 11 封板膜 2張
6 顯色劑B液 3ml×1/瓶 12 密封袋 1個(gè)
標(biāo)本處理及要求
1．血清,、血漿、腦脊液,、腹腔液標(biāo)本可直接測(cè)定,；
2．不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性,。
3．采集后盡早進(jìn)行實(shí)驗(yàn),，若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。
操作步驟
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔，在*,、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl,，然后在*、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,，混勻,；然后再各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三,、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,，混勻后，在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,；再各取50μl分別加到第五,、第六孔中，再在第五,、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul,，混勻；混勻后從第五,、第六孔中各取50μl分別加到第七,、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,，混勻后從第七,、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,，再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl,，濃度分別為120 ng/L,，80 ng/L，40 ng/L,，20 ng/L,，10 ng/L）。
2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,，其余各步操作相同）,、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）,。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動(dòng)混勻,。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去,，如此重復(fù)5次，拍干,。
6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3,。
8. 洗滌：操作同5,。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）,。
11. 測(cè)定：以空白空調(diào)零,，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）,。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

計(jì)算
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),，OD值為縱坐標(biāo),，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度,；再乘以稀釋倍數(shù),；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式,，計(jì)算出樣品濃度,，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度,。
注意事項(xiàng)
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完,，板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。
2．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,，洗滌時(shí)不影響結(jié)果,。
3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,，以避免試驗(yàn)誤差,。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣,。
4． 請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔,。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*的孔OD值）,，請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）,。
5． 封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染。
6．底物請(qǐng)避光保存,。
7．試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9．本試劑不同批號(hào)組分不得混用,。
10. 如與英文說(shuō)明書(shū)有異,，以英文說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)。
檢測(cè)范圍：
5 ng/L -150 ng/L
規(guī)格：
96人份/盒
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：,；2-8℃,。
2．有效期：6個(gè)月
 

 

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