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技術文章

集落刺激因子(CSF)的測定

閱讀:518          發(fā)布時間:2012-7-28

(一)生物活性檢測法
1.骨髓細胞集落形成法
(1)用含有10%FCS的RPMI-1640培養(yǎng)液制備0.3%~0.4%的軟瓊脂,。
(2)用淋巴細胞分層液分離得到骨髓單個核細胞,,以3×104—5×104細胞/mL接種于軟瓊脂中,,鋪在無菌平皿內,;37~C,,5%C02溫箱中培養(yǎng)14d。
(3)顯微鏡下計數(shù)大于或等于40個細胞的集落形成數(shù),,計算出集落刺激活力(colonystimulatingactivity,CSA),,計算公式如下:
CSA=集落形成數(shù)/105骨髓單個核細胞

2.依賴株3H-TdR摻人法 GM-CSF的依賴細胞株是DA3.15和IF-1,; M-CSF和G-CSF的依賴細胞株分別是M14和NES60.4。操作步驟同依賴株測IL-3,。

(二)分子生物學方法
利用CSF特異性cDNA探針,,檢測細胞中特定的mRNA表達,可用CL.LYl+2—9細胞作對照,。

(三)免疫學方法
同常規(guī)雙抗體夾心ELISA法,,該法能夠檢測到Pg/mL水平。國內已有試劑盒出售,。

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