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IL-4抗CD23單抗檢測法
閱讀:1124 發(fā)布時間:2012-5-26IL-4能促進B細胞膜表面CD23分子表達,,一些BurkittB淋巴細胞瘤株(如Jijoy細胞)未受刺激時,,CD23表達水平很低,,經(jīng)IL-4刺激后,CD23的表達呈劑量依賴性增加,。用抗CD23單抗間接免疫熒光法染色,,可檢測人IL-4活性。
(1)將5X105/mL的Jiioy細胞培養(yǎng)于含10%FCS的RPMI-1640培養(yǎng)液中,。
(2)取對數(shù)生長期細胞,,用新鮮培養(yǎng)液將細胞配成5X 105/mL,接種于24孔板中,,lmL/孔,。分別加待測標本及標準IL-4(不同稀釋度),并設(shè)陰性對照,,培養(yǎng)48~72h,。
(3)洗細胞2次,以106—107/mL濃度的細胞重懸于含1%BSA,,2mmoL/L疊氮鈉的PBS中,。將細胞轉(zhuǎn)人Falcon分析管中,離心棄PBS,,加100~L抗CD23單抗(5—10btS/mL),,置冰浴中15~30rain,,用上述PBS洗2次,。
(4)加適當稀釋的FITC標記的羊抗鼠IgC,,置冰浴15~30rain,同上洗細胞,,重懸細胞于含2mmol/mL疊氮鈉的PBS中,。
(5)用流式細胞儀分析CD23分子的表達,以陽性細胞百分率表示,,并計算IL-4活性單位,;或用熒光顯微鏡觀察CD23分子的表達。