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蛋白質(zhì)的膠體金標(biāo)記
閱讀:590 發(fā)布時間:2012-4-7當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)的zui適穩(wěn)定量及標(biāo)記的*pH值被確定以后,便可進行標(biāo)記,。具體步驟如下,。
(1)根據(jù)標(biāo)記所用膠體金的總量計算出所需要待標(biāo)記蛋白質(zhì)的總量。
(2)邊攪拌邊將蛋白質(zhì)溶液加入膠體金溶液中,,逐漸加入,,lmg的蛋白質(zhì)量大約需5min,或在攪拌下將膠體金逐漸加入到蛋白質(zhì)溶液中,,大約需5~10min。
(3)繼續(xù)攪拌10min,,然后加入5%BSA使其終濃度為1%,,或加入3%聚乙二醇(PEG,Mr:20000)使其終濃度為0.05%,,其效果BSA要優(yōu)于PEG,。
(4)將標(biāo)記好的膠體金裝入透析袋中,兩頭扎緊,,放人蔗糖或硅膠中濃縮,,濃縮到原體積的1/10量,濃縮完畢后純化,。如用離心純化方法時,,不需要濃縮。