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膠體金探針的質量鑒定
閱讀:847 發(fā)布時間:2012-4-71,。金顆粒的大小及均勻度
用有Formvar支持膜的鎳網(wǎng)蘸取金標記試劑,空氣干燥后,,透射電鏡下觀察金顆粒的大小及均勻度,,計算平均直徑,如電鏡放大倍數(shù)10萬,,照片放大為2.5倍,,100000×2.5=250000=25nm??諝庵懈稍锖笠宜徕欂撊?,在透射電鏡下觀察,可見金顆粒周圍有一明顯的空暈,,表示顆粒表面吸附著蛋白質分子。
支持膜(火棉膠膜)的制備,;50mil5%的火棉膠+50mi乙酸戊酯,,戊酯火棉膠。
2,。用免疫細胞化學濾紙模型鑒定免疫金制劑的特異性和敏感性制得2.5%的乙酸
在WhatmamI號濾紙條上滴加2//l的抗原溶液(含抗原量分別為1ug,、l00ng、10ng,、3ng和lng),,干燥后,紙條在甲醛蒸氣中固定。加適當稀釋的抗體作用1h,,用TBS(0.05mol/LpH7.4Tris緩沖液,,含.15mol/LNaCl),1%Triton X-l00洗3次,,每次10rain,。隨后,紙條再用洗脫SephacrylS-400柱的相同洗脫緩沖液洗lOmin,,再滴加不同稀釋度的金標探針孵育1h,。紙條再用TBS-Triton緩沖液洗3次,每次10rain,。用TBS(不含TritonX—100)洗10min,。再用雙蒸水洗3次各5min。用銀顯影液顯影30—40min,。用雙蒸水洗終止顯影,。
也可用下法試驗金探針:將系列稀釋的1:100、1,;200,、l;500,、1:1000和l:10000的正常兔血清2/11分別滴加在濾紙條上,,然后用甲醛蒸氣固定,紙片再用適當稀釋的羊抗兔IgG金探針在室溫中孵育1h,,洗滌,,再按上述方法用銀顯影。這方法可以初步測定金探針的質量,,也可用于一些抗原分析研究,。